cDNA末端快速扩增RACE探索.pptVIP

cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE) 基本RACE原理 技术背景 基本RACE 原理和方法 样品要求 RACE 产物的鉴定和全长 cDNA 的获得 技 术 背 景 得到某基因的片段、全长或近全长cDNA的方法： 建立和筛选cDNA 和DNA 文库。 利用GenBank 数据库中的表达序列标签(express sequence tags , ESTs) 拼接出全长或近全长cDNA 。 是多聚酶链式反应即PCR。 cDNA 末端快速扩增(RACE) 技术。 基本RACE 原理和方法 利用Oligo (dT) 对mRNA 进行反转录的同时在两头加上通用接头(引物) ， 从而可利用基因特异的引物 (gene specific primer，GSP) 通过PCR 反应快速获得 目的序列的5′端和 3′端。 5′-RACE法原理图 样品要求： ◇ 提取Total RNA的材料要新鲜，采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂。 ◇ Total RNA无降解，OD260/280=1.8 ~ 2.0。 ◇ 提供尽量多的实验材料：3′ RACE Total RNA＞15 μg；5′RACE Total RNA＞25 μg。如果基因的含量较低或者未知序列较长