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新型荧光探针测定细胞色素C 申烨华膏，杨小峰，李聪，毋尧 (西北大学化学系，西安710069) 摘要：本文建立了一种快速、高灵敏度测定细胞色素c的新型荧光分析方法。 c)可与 在十二烷基苯磺酸钠(SDBS)形成的胶束介质中，细胞色素c(Cytochrome 螺环型罗丹明B酰肼(RBH)作用形成强荧光物质罗丹明B，通过测定反应前后 的荧光变化，定量测定细胞色素C的含量。测定线性范围为4．0～120．0ng／IIlL， 相关系数r=0．9988，检出限为0．87 ng,／mL。 关键词：细胞色素C；罗丹明B酰肼；荧光探针 细胞色素c是一种细胞呼吸激活剂，并与细 mL 4．0)，0．8 (pH 胞调亡有密切关系。临床上可作为组织缺氧治疗 浓度的细胞色素C，反应溶液于室温下放置10 的急救用药和辅助用药，用于治疗哮喘、肺炎、肺 8．0 min，加入pH 气肿及支气管扩张引起的呼吸困难、CO中毒、神 mL，并用水定容。于激发波长567nm，发射波长 经麻痹症等n]。细胞色素c的测定对疾病的诊断 592 nm处测量溶液的相对荧光强度值。 和治疗是很重要的。其测定方法主要有蛋白质印 2结果与讨论 迹法【2J、酶联免疫吸附法[3]、分光光度法H1等。本 2．1光谱特性 文提出了一种新型的荧光探针测定细胞色素C的 实验中考察了反应体系的可见光谱特性和荧 方法。 光光谱特性。图l为RBH与细胞色素c在SDBS 本文发现，无色、无荧光的螺环型罗丹明B 介质中反应后溶液的可见吸收光谱图。从图中可 酰肼(fuBH)的十二烷基苯磺酸钠(SDBS)水溶液中 以看出，RBH本身没有明显的可见特征吸收，但 加入细胞色素c后，体系荧光强度会迅速升高，利 在RBH的SDBS溶液中加入细胞色素c后，在560 用荧光强弱可以测定细胞色素c的含量。 n／n波长处出现明显的吸收峰，说明反应生成了有 1实验部分 色物质，并且在一定范围内吸光度与细胞色素C 1．1仪器与试剂 的浓度成线性。 仪器：970CRT荧光分光光度计(上海三科仪 器有限公司)，实验中激发、发射狭缝均设为10 0．4 rim；UV．1700紫外可见分光光度计(日本岛津)。 试剂：细胞色素C标准品由大阪大学蛋白质 03 《 研究所Akutsu教授实验室惠赠。RBH为实验室自 篓02 己合成‘引。