分子遗传学1绪论.ppt

* * 二、双螺旋结构的构象变异 DNA的构象现已知有： A，B，C，D，E，T，Z 7种。 引起DNA双链构象改变有以下因素： （1）核苷酸顺序； （2）碱基组成； （3）盐的种类； （4）相对湿度。 三 、左旋DNA （一）Z-DNA的结构特点： （1）糖磷骨架呈“之”字形（Zigzag）走向。 （2）左旋。 (3) G的糖苷键呈顺式，使G残基位 于分子表面。 （4）分子外形呈波形。 (5) 大沟消失，小沟窄而深。 (6) 每个螺旋有12bp。 目前已知DNA双螺旋结构可分为A、B、C、D及Z型等数种，除Z型为左手双螺旋外，其余均为右手双螺旋。 Z-DNA B-DNA Z－DNA存在的条件： (1) 高盐：NaCl2Mol/L, MgCl20.7 Mol/L (2) Pu,Py相间排列： (3)在活细胞中如果m5C,则无需嘌呤-嘧啶相间排 列，在生理盐水的浓度下可产生Z型。 (4)在体内多胺化合物，如精胺和亚胺及亚精胺和阳离 子一样， 可和磷酸基因结合，使B-DNA转变成 Z-DNA。 (5)某些蛋白质如Z-DNA结合蛋白带有正电荷，可使DNA周围形 成局部的高盐浓度和微环境。 (6)负超螺旋的存在 (二)生物学意义 (1) 可能提供某些调节蛋白的识别。啮齿类动物病毒的复制 起始部位有d（GC）有交替顺序的存在。 (2) 在SV40的增强子中有三段8bp的Z-DNA存在。 (3) 原生动物纤毛虫，它有大、小两个核，大核有转录活性，小核和繁殖有关。Z-DNA抗体以萤光标记后，显示仅和大核DNA结合，而不和小核的DNA结合，说明大核DNA有Z-DNA的存在，可能和转录有关。 四、DNA的三级结构 所谓DNA的三级结构，是指在一二结构基础上的多聚核苷酸链上的卷曲。在一定意义上，是指双螺旋基础上的卷曲。 三级结构包括链的扭结和超螺旋或者是单链形成的环或是环状DNA中的连环体 超螺旋（Supercoied） 松驰型DNA （relax form）。 超螺旋（Supercoied） DNA， 负超螺旋 正超螺旋 检测DNA三级结构的方法： 密度梯度离心 凝胶电泳 电镜观察 DNA的超螺旋结构 原核生物DNA的三级结构： 绝大多数原核生物的DNA都是共价封闭的环状双螺旋。如果再进一步盘绕则形成麻花状的超螺旋三级结构。 第四节 DNA的变性与复性 变性（denaturation）或解链（melting〕 复性（renaturation）或退火（annealing） DNA的复性对片段有两个要求： (1) 互补顺序的碰撞和排列； (2) 碱基的正确配对和氢键的形成。 下列因素可导致DNA变性： 高温、 酸、 碱、 尿素、 甲酰胺 DNA变性后物理性质发生的变化： （1）流体力学的性质发生改变：粘度下 降，而沉降速度增加； （2）提高了对紫外线的吸收能力，此称为 增色效应（hyperchromic effect）。 双链DNA的A260=1.00（浓度为50μg/ml时，对波长260nm紫外线的吸收能力）； 单链DNA的A260=1.37； 游离碱基或核苷酸的A260=1.60。 解链温度（melting temperature, Tm）或熔点，Tm是A260的升高达到极大值一半时的温度。即是变性温度范围的中点。 影响变性的因素： 外部条件如温度和正离子的浓度。 浓度低于0.4mol/L，单价阳离子增高10倍， Tm增加16.6° 内部条件 GC含量及分子类型 当GC的含量上升1%，则Tm上升0.4℃ 马默多蒂（Marmur-Doty）关系式： Tm = 69.3+0.41(G +C)%， 或 GC%=（Tm-69.3）×2.44 复性动力学 C 1 1 C0 2 1+KC0t1/2 C0 ：DNA初始浓度 C：复性时DNA浓度 t：复性时间 C0t：DNA浓度与时间的积，代表复性速度 C0t1/2：半数DNA复性时，DNA浓度和复性时间的积 复性进行一半