原创力文档- 1、本文档共12页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
ResearchArticle研究报告
Acta Microbiologica Sinica 2017, 57(3): 447-458
/actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxbResearch Article 研究报告
操纵茶树类黄酮 3′-羟基化酶生物合成 B 环-3′,4′-二羟基黄酮类 化合物
周天山*，余有本，肖斌，鮑露，高岳芳
712100
摘要：
3′- B -3′,4′-
4
3′-
(CsF3′H)
P450
(ATR)
SUMO-CsF3?H[7-517]::ATR1[49-688] 3 AA SUMO-CsF3?H[28-517]::ATR1[49-688]
3 AA SUMO-CsF3?H[7-517]::ATR2[75-711] 3 AA SUMO-CsF3?H[28-517]::ATR2[75-711] 3 AA
TOP10 DH5α BL21
12
S1–S12
3′-
CsF3′H
pYES-Dest52-CsF3′H
WAT11
S13
3′-
CsF3′H
pES-URA-CsF3′H
3- CsF3H
AtFLS
pES-HIS-CsF3H::AtFLS 9AA
WAT11
S14
SUMO-CsF3?H[28-517]::ATR1[49-688] 3 AA
TOP10
S6 25 °C
1000 μmol/L
287.93 μmol/L
131.76 μmol/L
188.62 μmol/L
S13
1000 μmol/L
734.32 μmol/L
446.07 μmol/L
594.64 μmol/L
S14 5 mmol/L
36–48 h
1412.16 μmol/L
490.25 μmol/L
445.75 μmol/L
66.75 μmol/L
73.50 μmol/L
3′- B -3′,4′-
关键词：
3′- B -3′,4′-
[1]
2 (A B ) 15 [2]
(C )
基金项目：
(CARS-23)
*通信作者 Tel/Fax +86-29E-mail zhoutianshan@
收稿日期：2016-08-19 修回日期：2016-12-01 网络出版日期：2016-12-12
448
B
[3–5]
(combinatorial biosynthesis)
[6–7] [8]
Tianshan Zhou et al. | Acta Microbiologica Sinica, 2017, 57(3)
4′,5′-
2 (F3′H)
B 4′-
A B 3′ B 3′,5′
P450
3′-
3′,5′-
(F3′5′H)[11–14]
3′-
B 3′
1
12%–24% ( )[16]
P450
3?3-
B -3′,4′-
[9–10]
B 4′B -3′,
3 B -3′,4′-
图 1. B 环-3′,4′-二羟基黄酮类化合物生物合成途径[15] Figure 1. The biosynthetic pathway of B-3’,4’-dihydroxylated flavones. F3′H: flavonoid 3′-hydroxylase; F3H: flavanone 3-hydroxylase; FLS: flavonol synthase[15].
actamicro@
| , 2017, 57(3)
449
1 材料和方法
1.1 1.1.1
)
( Col-0
–80 °C
1.1.2
Escherichia coli TOP10 E. coli DH5α
E. coli BL21 Saccharomyces cerevisiae WAT11
pYES-Dest52 pES-URA pES-HIS
1.1.3 [(±)-eridodictyol]
(kaempferol) (quercetin)
[(±)-naringenin] [(±)-dihydrokaempferol] (dihydroquerctin)
Sigma-Aldrich (USA)
1.2
TaKaRa RNAiso Plus Total RNA
(Arabidopsis thaliana)
(Camellia sinensis)
RNA
TaKaRa
PrimeScriptTM RT reagent kit
cDNA
NCBI
P450
(ATR)
(FLS)
3’-
(F3′H)
3-
(F3H)
PCR ( 1)
50 μL PCR
10 μL 5×HF PCR
4 μL dNTPs (
10 mmol/L) 2.5 μL
( 10 μmol/L) 4 μL cDNA (
50 ng/μL) 0.5 μL Phusion? High
文档评论（0）