基因工程的基本操作分解.ppt

将目的基因导入植物细胞的方法： 1、农杆菌转化法 （适用于双子叶植物和裸子植物） （1）农杆菌介绍 （2）原理及适用范围 (三)将目的基因导入受体细胞 （1）农杆菌转化法 ①特点： Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。 ②转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒（钨粉粒子和金粉粒子）表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 （2）基因枪法 常用于单子叶植物 （3）花粉通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 我国科学家独创 将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中） 基因工程的基本操作程序主要包括 四个基本步骤： 1）目的基因的获取 2）基因表达载体的构建 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测与鉴定 基因工程的基本操作流程 步骤一：目的基因的获取 目的基因是人们所需要转移或改造的基因, 获取目的基因是实施基因工程的第一步 。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。 启动子 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____的 编码区是间隔的、_____的 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 与生物抗逆性、优良品种，生物药物以及工业所需用酶有关的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 2、获取目的基因的常用方法有哪些? （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 （一）从基因文库中获取目的基因（序列未知） 1.什么叫基因文库？ 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （cDNA文库） 基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因。 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因组文库与部分基因文库的关系 基因组文库的构建模式图 部分基因文库的构建模式图 基因组文库和部分基因文库的比较 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子 基因中内含子 基因多少 物种间基因交流 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 基因组文库与部分基因文库的关系 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢? 目的基因的提取方法 直接分离基因 人工合成基因 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA ：鸟枪法 鸟枪法： 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 与载体连接 载入 受体细胞 产生特定性状 导