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网络构建 1.排卵指卵子从卵泡中排出,并非卵泡从卵巢中排出。 2.桑椹胚细胞仍具有全能性,是胚胎分割的最佳时期。囊胚开始出现分化形成内细胞团和滋养层,内细胞团细胞可发育成胎儿的各种组织,该阶段也可进行胚胎分割。 答案提示 1.胚胎移植过程中两次使用促性腺激素,第一次对受、供体进行同期发情处理;第二次用于供体的超数排卵。 2.(1)来源:早期胚胎或原始性腺。 (2)特点:形态上,体积小、核大、核仁明显;功能上具有发育的全能性;体外培养条件下可以增殖而不分化。 3.(1)食物安全问题 (2)生物安全问题 (3)环境安全问题 【例1】 (2012·山东理综,35)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIF Ⅱ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIF Ⅱ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。 (1)过程①中最常用的运载工具是________,所需要的酶是限制酶和________。 (2)在过程②中,用________处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中,将成纤维细胞置于5% CO2的气体环境中,CO2的作用是________。 (3)在过程③中,用________处理以获取更多的卵(母)细胞。成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行________处理。 (4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是________。在胚胎移植前,通过________技术可获得较多胚胎。 解析 此题综合考查基因工程、细胞工程、胚胎工程等知识。(1)构建基因表达载体时,一般需用同一种限制酶切割目的基因和载体,以产生相同黏性末端,并用DNA连接酶连接成重组表达载体。常用的载体是质粒。(2)利用胰蛋白酶或胶原蛋白酶可将动物组织分散成单个细胞。动物细胞培养时,需将细胞置于5% CO2的气体环境中,CO2的作用是维持培养液的pH。(3)运用超数排卵法可获得更多的卵母细胞,常用的激素是促性腺激素或促滤泡素。成熟卵细胞在核移植前要进行去核处理。(4)核移植时获得的重组细胞经过早期胚胎培养,可以获得早期胚胎。为获得更多胚胎,可以使用胚胎分割法。 答案 (1)质粒 DNA连接酶 (2)胰蛋白酶(或胶原蛋白酶) 维持培养基(液)的pH (3)促性腺激素(或促滤泡素,孕马血清) 去核 (4)(早期)胚胎培养 胚胎分割 【预测1】 据《青岛日报》消息,国家863计划项目“利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用蛋白”取得重大进展。目前,青岛某实业有限公司已经成功获得经纯化的抗凝血酶Ⅲ蛋白,是继美国GTC公司之后,世界上第二家拥有该技术的企业,此次重大进展是我国生物制药领域自主创新的重大突破。如图是制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图: (1)根据流程图分析,动物乳腺生物反应器主要利用了________技术、胚胎工程技术和细胞培养技术。 (2)要实现①超数排卵,应在崂山奶山羊A发情周期的某一阶段用________处理,然后在恰当时期采集卵子。通过②采集的精子不能直接使成熟的卵子受精,原因是___________。 (3)过程④需将抗凝血酶Ⅲ基因注入受精卵的雄原核内,在显微镜下判断是否完成受精作用的标志是________。 (4)要使人的抗凝血酶Ⅲ基因在奶山羊乳腺细胞中特异性表达,完整的基因表达载体要包括目的基因、________、________、标记基因等部分。在过程⑤之前要检测早期胚胎细胞是否已经导入抗凝血酶Ⅲ基因,宜采用________技术。 (5)若要一次获得多只相同的转基因崂山奶山羊D,在过程⑤中应采用________技术。 解析 解答本题的关键是理清制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图涉及的有关技术手段。(1)从图解中可以看出,涉及的过程有体外受精、胚胎移植、DNA重组,涉及的技术手段有基因工程、胚胎工程和细胞培养技术等。(2)体外受精主要包括卵子的采集和培养、精子的获能和受精等步骤。采集卵子时,用促性腺激素处理供体,使其排出更多的卵子,然后,从输卵管中冲取卵子,与获能的精子在体外完成受精。 (3)精子入卵后形成一个雄原核,与此同时,精子入卵后被激活的卵子完成减数第二次分裂,排出第二极体后形成雌原核,并在卵黄膜和透明带的间隙观察到两个极体。(4)基因表达载体包括目的基因、标记基因、启动子、终止子等部分,目的基因的检测可采用DNA分子杂交技术。 答案 (1)转基因(DNA重组) (2)促性腺激素 精子没有获能 (3)在卵黄膜和透明带的间隙观察到两个极体 (4)启动子 终止子 DNA分子杂交 (5)胚胎分割 1.分清两个标志——受精的标志和受精完成的标志 (1)受精标志:在透明带和卵黄膜之间观察到两个极体。 (2)受精完成的标志:雌、雄原核的融合。 2.克隆动物的培育流程 (1)根据发育成新个体D的重组细胞核由动物B提供,而性别及大多数遗传性状是由核内遗
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