柑橘植株对伤刺激的生理应急反应.pdf

326 中国园艺学会热带南亚热带果树分会成立大会暨首届学术研讨会论文集 柑橘植株对伤刺激的生理应急反应木 谢永红1，刘国杰2，王红青2，欧毅1，丁志祥1，陈霞1 (1．重庆市果树研究所，重庆江津402260；2．中国农业大学农学与生物技术学院，北京100094) 摘要：本文以枳和红桔20d苗龄的实生苗作试验材料，用针刺植株下层叶片进行伤诱导，分析顶端 完整叶片内茉莉酸(JA)、蛋白酶抑制剂累积动态及PE、PPO活性变化。研究结果表明，伤刺激诱导枳和 红桔JA累积，在3h左右含量最高。植株在2h就出现明显的蛋白酶抑制剂I累积，4～8h的累积速度最 快，而未刺伤处理的对照植株没有JA和蛋白酶抑制剂的累积。在伤刺激12h后顶端叶片PPO活性呈增加 趋势，同时诱导枳和红桔叶片PG活性增加，在4h左右达到活性高峰。说明柑橘植株对伤刺激有感应 而且具有和茄科植物类似的伤信号转导机制。 关键词：应急反应：植物系统素；伤信号；柑橘；PPO；蛋白酶抑制剂 系统素是植物在受到昆虫取食或其他外伤时在细胞质中产生的具有信号转导功能的内源多肽物 质，最先是在番茄叶片中分离得到Ⅲ，而后在马铃薯、辣椒和烟草等其他几种茄科作物中也得以分离鉴 定∞1。系统素在植物伤信号应答中起关键作用，它能在整个植株进行伤信号的快速转导并诱导蛋白酶 抑制剂基因、多酚氧化酶基因、蛋白酶基因和多种未知功能蛋白基因的表达，诱导产生蛋白酶抑制剂、 PPO等20多种防卫性蛋白陆31，形成植物的系统抗性。系统素与受体结合后，首先开启质膜离子通道， 瞬时增加Ca2+浓度，激活蛋白激酶和磷脂酶的活性，促进质膜H+一ATP酶失活与磷脂水解，释放出亚 麻酸，进而产生茉莉酸p1。然后在乙烯的参与下诱导防卫基因的表达，产生多种功能蛋白，如PPO、蛋 白酶抑制剂等。在伤信号远端转导途径中，需要系统素和茉莉酸在信号途径中协同作用才能激活相关 防御基因的表达H1。有关植物伤信号的转导途径和抗性表达主要集中在茄科植物进行了深入的研究。而 柑橘植株经常受到病虫、修剪等伤害，至今没有柑橘对伤诱导的防御陛生理反应的报道。本文以枳和 红桔20d幼苗作试验材料，研究了柑橘在刺伤处理后伤信号转导途径的中间产物和诱导产生的防卫蛋 白的累积动态。为果树伤信号转导途径和防卫反应机理研究奠定基础，对提高果树抗虫性和增强自我 修复能力具有重要意义。 l材料与方法 1．1试验材料 tHfoliate Hort．Ex 用20d苗龄的枳(PoneimsRaf)、红橘(CitrustangeHnaTanaka)实生苗做试验材料。 种子用0．1％HgClz溶液消毒10min，洗净后在25℃培养箱中发芽，生长一致的幼芽在育苗盘中用MS 培养液恒温光照培养，每天光照12h，。幼苗生长20d用于试验。 1．2试验处理 试验设置2个处理，每个处理30株，4次重复。 对照：以完整植株作对照。 ‘重庆市自然科学基金资助项目(2003．7849) 中国园艺学会热带南亚热带果树分会成立大会暨首届学术研讨会论文集 327 刺伤处理：用针尖在最下部叶片表面刺30个伤口。 处理植株在5000lx，25℃光照培养，每间隔一定时间取顶端叶片进行分析。 1．3分析方法 PG酶活性测定：参照Pressey，R．(1986)柳的方法在低温条件下进行PG酶的提取分离测定。 ml100 PPO活性分析：叶片组织用5 7．0)在4℃研磨浸提，低温 mmol·L-。磷酸盐缓冲液(pH mL100 离心分离。用绿原酸做为PPO底物，用分光光度法测定PPO活性。反应体系为1mmol·L-1磷 mmol 6．0)中，含2mmol绿原酸，502一硝基一5一硫代苯甲酸，0．5 酸二氢钠一柠檬酸钠缓冲液(pH