梨不同花龄花柱S基因表达量与自交不亲和性强度的关系.pdfVIP

梨不同花龄花柱S基因表达 量与自交不亲和性强度的关系 张绍铃1 陈迪新1’2 吴俊1 吴华清1 (1南京农业大学果树研究所，南京210095；2河南科技大学林学院，洛阳471003) 摘要：经切片观察梨花柱为具有引导组织的实心型花柱，引导组织位于花柱的中央，呈漏 斗状，花柱引导组织体积约占花柱总体积的1／3左右。在开花前期，细胞分裂活动旺盛，开 花后期，细胞分裂活动逐渐减弱。不同花龄花柱可溶性蛋白中的S-RNase含量不同，开花前 RNase含量显著下降。通过测量花柱长度、体积及引导组织体积，初步计算出单根花柱孓 育S—RNase含量不断上升，其浓度也在不断上升。这些结果与梨的蕾期授粉和延迟授粉可 提高坐果率相一致。 关键词：花龄；引导组织；S基因；S-RNase；自交不亲和性强度 不同植物的自交不亲和性反应所发生的部位不同，孢子体型主要表现为花粉在柱头上不 萌发，配子体型大多表现为花粉管在花柱中停止生长，也有花粉管在子房中停止生长的 OSI)，作为配子体型自交不亲和果树梨，花粉管停止生长的位 (Ovaryself-incompatibility 置在花柱的引导组织中[1I。目前，一致认为其主要原因为花柱引导组织中含有一定量的孓 得出花柱引导组织的S-RNase浓度(含量／体积)，结合荧光观察花粉管生长情况及田间授 粉统计坐果率的结果[3]，阐明了S-RNase浓度与自交不亲和性强度的关系，对梨自交不亲 和研究具有重要的意义。 1材料与方法 1．1材料 4d的‘菊水，花柱，称量后立即储存于液氮中。另采集‘菊水’即将开花的枝条，插入3％ (w／v)蔗糖的水溶液中，在光照培养箱内培养备用。 1．2方法 1．2．1不同花龄花柱横切面的特性 h以上，选取中上部的花柱进行常规 将不同花龄的‘菊水’花柱用FAA固定液固定24 180梨科研与生产进展(三) 石蜡切片包埋，参考张丕方和倪德祥等[4]的方法进行切片、脱水、染色及封片等，在显微镜 下观察并照相。 1．2．2花柱长度和鲜重的测定 在采集的不同花龄的花柱中随机取出花柱各10根，分别测量其长度，每个发育阶段重 复三次，计算其平均长度和标准误。花柱鲜重参考张绍铃等[5]的方法。 1．2．3花柱引导组织及整个花柱体积的测量与计算 采集不同花龄的花柱进行冰冻切片，选取穿过花柱中心部分的切片，在显微镜下进行观 察和测量其柱头下和花柱基部的花柱直径及引导组织的直径，结合前面的长度换算为体积， 体积计算公式为圆台的计算公式，每个发育阶段重复3次。 1．2．4花柱可溶性蛋白质的提取及定量 1．2．4．1可溶性蛋白质的提取 参考张绍铃等[6]的方法，获得可溶性蛋白质，经透析后贮于冰柜中待用。 1．2．4．2可溶性蛋白质定量 ml (1)CBBG一250配置：用2595％的乙醇溶解0．05g的CBBG一250，再加85％的 G一250 磷酸50m1，加水到500ml，过滤，获得的最终浓度为CBB 0．01％(w／v)，乙醇 4．7％(w／v)，磷酸8．5％(w／v)。 M NaCl(O．96426 (2)标准样(BSA)：牛血清蛋白为标准蛋白；配置0．15 gNaCI溶 ml 0．15M 解成110m1)；用100 NaCl溶解0．1256g牛血清蛋白。 (3)测定：在冰中溶解花柱蛋白，取样10t-l加入3个平行样的小管中，作上标记，各 加纯水90／xl；取标准液50弘l，3个平行样，加纯水50／-I；对照取100pl纯水，3个平行样， 上述各样加入CBBG一250比色液3ml，用分光光度法测定A595。 1．2．5RNase活性量的测定 参照Bro