茜素红染色.docVIP

茜素红染色1.培养皿用PBS冲洗2次，95%乙醇固定10min，蒸馏水冲洗3次2.0.1%茜素红－Tris-Hcl(PH 8.3)37度，30min，0.1%茜素红－Tris-Hcl(PH 8.3)　1g Tris（1g左右Tris均可）　加入三蒸水100ml中，用滴管往配制液中加HCl（分析醇），一滴滴地加，边加边测试PH，待PH为8.3左右即可（无精密PH测试仪，用PH试纸也是一样的，但是要能测到8点几的PH试纸），配好后往里面加0.1g的茜素红，便得到0.1%茜素红－Tris-Hcl(PH 8.3)溶液。Cultured pulp cells in 24-muiltiplates were fixed in 10% formalin and incubated with 1% Alizarin Red S (Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, USA) solution for 10 min at RT for Alizarin Red S staining Dahl-McGec-Russell茜素红S法：固定：10%缓冲的甲醛液避免用含钙的固定液。固定2小时试剂配制：1。茜素红S液：茜素红S 1g蒸馏水 90ml1%氢氧化铵 10ml此液PH值应在6.3左右，此溶液至少可保存1个月。2。醋酸液：醋酸 0.2~1ml蒸馏水 100ml3。淡绿液：淡绿 0.2g蒸馏水 100ml染色方法：1.切片脱蜡至水2.入茜素红S液中 5 min3.快速蒸馏水流4.淡绿 20-30秒5.醋酸液速洗6.无水酒精快速脱水7.二甲苯透明，中性树胶封固。1、1M Tris-HCl????（pH7.4，7.6，8.0）????? □组份浓度 1 M Tris-HCl? □配制量 1L? □配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 ???????????????????????? 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。???????????????????????? 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 ??????????????????????????????????????????????????????? pH值????????????????????? 浓HCl ??????????????????????????????????????????????????????? 7.4???????????????????????? 约70mL ??????????????????????????????????????????????????????? 7.6???????????????????????? 约60mL ??????????????????????????????????????????????????????? 8.0???????????????????????? 约42mL ??????????????????????? 4. 将溶解定容至1L。 ?????????????????????? 5. 高温高压灭菌后，室温保存。?????????????????????????? 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl???（pH8.8）?? □组份浓度 1.5 M Tris-HCl? □配制量 1L? □配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 ?????????????????????????? 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 ?????????????????????????? 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 ??????????????????????????? 4. 将溶液定容至1L。 ????????????????????????? 5. 高温高压灭菌后，室温保存。?注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer???（pH 7.4，7.6，8.0）?? □组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA? □配制量 1L? □配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 ????????????????????????????? 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL ????????????????????????????