DA-SOP-OP-106AFP抗体检测标准操作规程.doc

1.目的： 辅助组织病理学诊断 2.实验原理： 利用抗原与抗体间的特异性结合原理和特殊的标记技术,对组织和细胞内的特定抗原或抗体进行定位、定性或定量检测的一门技术。 3.试剂： 3.1组成：AFP抗体(即用型抗体)、UltraSensitive TM S-P超敏试剂盒（鼠/兔）、PBS缓冲液PH：7.4-7.6、柠檬酸抗原修复液PH：6.0±0.1、环保透明剂、无水酒精、95%酒精、DAB显色液、苏木素染液等。 3.2 保存要求：AFP抗体 、UltraSensitive TM S-P超敏试剂盒（鼠/兔）存放于2-8℃冰箱、DAB显色液存放于2-8℃冰箱避光保存。 4.标本要求 4.1 标本类型：石蜡切片 4.2 保存要求: 切完片后立即存放于62-68℃的低温烤箱2小时烤片。 5.操作步骤 5.1核对蜡块与免疫组化申请单信息是否一致，在免疫组化登记本上登记病理号、病人姓名、年龄、性别、送检医院等，写免疫组化标签，准备好需做标记项目的涂胶玻片待用。 5.2切片：蜡块需放入冰箱冷冻20-30分钟，再切片。 5.3 切完片后立即存放于62-68℃的低温烤箱2小时烤片。 5.4 石蜡切片脱蜡至水： 环保透明剂2道各15分钟-无水酒精2道各5分钟-95%酒精2道各5分钟-75%酒精1道5分钟-水洗5分钟。用PBS冲洗三次，每次3分钟（3*3分钟）。 5.5抗原修复：取适量已稀释成工作液的柠檬酸抗原修复液于微波盒中，将微波盒放置于微波炉中，高档加热至沸腾；将切片置于耐高温染色架上，放于已沸腾的修复液中，盖上盖，调至中-低档继续加热20min。将微波盒取出，室温自然冷却10min后，用自来水冲洗干净，再用PBS冲洗三次，每次3分钟（3*3分钟）。 5.6去除内源性过氧化物酶：每张切片滴加1滴过氧化物酶阻断溶液，室温下孵育10分钟，水洗，再用PBS冲洗三次，每次3分钟（3*3分钟）。 5.7甩去PBS缓冲液，每张切片加1滴正常非免疫动物血清，室温下10min。 5.8除去血清，每张切片加1滴AFP抗体，4℃冰箱过夜。水洗，再用PBS冲洗三次，每次3分钟（3*3分钟）。 5.9甩去PBS缓冲液，每张切片加一滴生物素标记的第二抗体，室温下孵育10分钟。水洗，再用PBS冲洗三次，每次3分钟（3*3分钟）。 5.10甩去PBS缓冲液，每张切片加1滴链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温下孵育10分钟。水洗，再用PBS冲洗三次，每次3分钟（3*3分钟）。 5.11甩去PBS缓冲液，每张切片加2滴或100ul新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察2-10分钟，阳性胞质为棕色。 5.12自来水冲洗，苏木素复染，自来水冲洗5分钟返蓝。 5.13切片脱水透明，中性树胶封片，黏贴标签。 5.14染色结果：细胞核蓝色，阳性细胞质棕色。 6.注意事项 6.1 AFP抗体保存条件：试剂需在2-8℃（不可冰冻）避光条件下进行保存。每次使用后，应立即放回2-8℃的冰箱进行保存。抗体的保质期为12个月。如果试剂不是按产品说明书的条件储存，可能影响其使用效果。 6.2为防止组织脱片，需使用防脱载坡片。 6.3 在整个实验过程必须避免干片，始终保持湿润。 6.4 DAB必须现配现用，在半小时内使用完毕。 6.5切片脱蜡、脱水试剂用1000张片子更换一次试剂。更换情况记录在《组化试剂更换表》（DA-SOP-OP-100-B02）上。 7.参考文献 7.1基因公司提供的《AFP抗体使用操作说明书》 8.记录表格 编写者签名： 审核者签名： 批准者签名： 日 期： 日 期： 日 期： 作业指导书 文件编号：WH-DA-SOP-OP-106 版本号： 第 4 版 第 0 次修订 主题：AFP检测标准操作规程 生效日期：2014 年 1月 1日 页 码： 第 2 页 共 3 页