6+种子培养讲解.pptVIP

种子扩大培养概念： 将保存在砂土管、冷凉干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过摇瓶及种子罐逐级扩大培养，获得一定数量和质量的纯种过程。 生产车间种子制备工艺可控参数: 3.生长更慢的菌种 链霉素生产菌种灰色链霉菌，一般采用三级种子罐扩大培养。 在小型发酵罐(5—30L)进行试验时，也有采用直接孢子或菌丝体接入罐中发酵，称一级发酵。 影响种子质量的因素 种子质量的判断 种子质量的控制 第二节 种子质量的控制 * * 种子扩大培养 生物工艺学第6章 15L种子发酵罐 300L啤酒发酵罐 第一节 种子制备工艺 实验室准备阶段 生产车间阶段 放罐，后处理 产品 种子质量的优劣对发酵生产起关键作用。其生产方法与条件随不同的生产品种和菌种种类而异。 发酵罐(几十或几百立方米) 按10%接种量 种子液(几或几十立方米) 由实验室制备到车间生产 的过程 作为种子的要求： 1) 、菌种活力强，移种后能迅速生长，迟缓期短 2) 、生理性状稳定 3) 、菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求 4) 、无杂菌污染 5) 、保持稳定的生产能力 一、 实验室种子制备 接入斜面/平板，培养成熟后，挑选孢子，再一次接入斜面/平板，进行活化。(两次转接) A、砂土管或冷冻干燥管菌种活化 可采用固体培养基培养孢子，直接作为种子罐的种子。 举例:产黄青霉菌，采用大米或小米为固体培养基，装入摇瓶、灭菌，耍注意控制米粒含水量，使米粒不粘不散。接入孢子，25-28℃培养14d。培养结束，将孢子瓶于真空下抽去水分，使含水量10％以下，冰箱保存备用。 B、产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁殖快的菌种 可以用摇瓶液体培养法，孢子接入液体培养基，振荡培养，获得菌丝体，作为种子。 例如：灰色链霉菌、卡那链霉菌。 C、产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种 生产上一般采用斜面营养细胞保藏法。 斜面菌种于32℃，培养18-24 h，即可移入250mL摇瓶液体培养基，32 ℃培养12 h，即可作种子罐种子。 例如：谷氨酸棒状杆菌。 D、不产孢子的细菌 一般保存在麦芽汁琼脂培养基或MYPG培养基的斜面上，4℃冰箱保存.每年移种3-4次。 斜面菌种→接入含10mL麦芽汁试管→25-27℃培养2-3d→扩大至三角瓶→25℃培养2d→移至含5-10L麦芽汁的罐→15-20℃培养3-5d→含100L麦芽汁的发酵罐。 E、生产啤酒的酵母菌 MYPG培养基：3g麦芽浸出物，3g酵母浸出物，5g蛋白胨, 10g葡萄糖,20g琼脂,1L水。 二、生产车间种子制备 采用易被菌利用的成分，如葡萄糖、玉米桨、磷酸盐等，同时还需供给足够的无菌空气并不断搅拌，使菌丝体在培养液中均匀分布，获得相同的培养条件。 种子罐培养原则： 摇瓶菌丝体种子： 种子罐之间或发酵罐间的移种： 接种方法： 可在火焰保护下接入种子罐或采用压差法接入。 主要采用压差法，由种子接种管道进行移种. 种子罐级数 种龄 接种量 A 种子罐级数的确定 种子罐级数指制备种子需扩大培养的次数. 种子罐级数的意义： 种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并可减少移种带来染菌机会。 但也必须考虑尽量延长发酵罐生产产物的时间，缩短由于种子发芽、生长而占用的非生产时间，以提高发酵罐的生产率。因此，种子罐级数不宜过少。 种子罐级数随菌种及规模而定，也与工艺条件有关。 优化种子罐培养条件，加速孢子发芽及菌体繁殖，也可减少种子罐的级数。 1、生长快的细菌，种子用量少，种子罐相应也少。 例如：谷氨酸生产中，菌接入种子罐32℃培养7一10h，即可接入发酵罐作为种子，这称为一级种子罐扩大培养，也称二级发酵。 2、生长较慢的菌种，种子用量大，种子罐相应也多。 例如：青霉素孢子悬液接入一级种子罐（发芽罐）于27℃培养40h，孢子发芽，长出短菌丝。再移至第二级种子罐（繁殖罐），27℃培养10-24h，菌丝迅速繁殖，获粗壮菌体，即可移至发酵罐，这称为二级种子罐扩大培养，也称三级发酵。一般50m3发酵罐都采用三级发酵。 接种龄以菌丝处于对数生长期，且培养液中菌体量还未达到最高峰时，较为合适。 过于年轻的种子：前期生长缓慢、发酵周期延长、产物形成推迟，甚至会因菌丝量过少而在发酵罐内结球，造成异常发酵的情况。 过老的种子：会引起生产能力下降，菌丝过早自溶。