温度对厚指海绵Pachychalila+sp体内真细菌组成的影响.pdfVIP

疆建陵n 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19．23 温度对厚指海绵Pachychalilasp．体内真细菌组成的影响 方再光1邓中日1,2黄勃1鲍实翔3 学院热带作物生物技术国家重点实验室海口571001 摘要：温度是影响生物多样性的重要原因之一，本研究采用ARDRA方法分别对生长在同一 sp．体内真细菌的 海域、不同生长温度条件下(三月份15C、七月份30C)厚指海绵Pachylila 多样性进行了分析，研究海水温度对厚指海绵Pachylilasp．体内真细菌组成的影响。研究结果 表明：海水温度可以导致厚指海绵Pachylilasp．体内真细菌的种类和数量发生改变；但真细菌 总的群落结构没有发生明显的改变。 关键词：温度；厚指海绵Pachylilasp．；真细菌 环境因子可以影响海洋生物体内微生物的种类和数量【l2】。在影响生物多样性的诸多因素 中，温度是影响生物多样性的重要因素。微生物是构成地球生物多样性的重要组成部分，任 何一种微生物都有它生存所需的适宜环境温度，环境温度的改变势必引起微生物组成和种类 发生改变。如GC denHoek(1974)认为，温度是影响真菌分布的最重要的因 Hughes和Van 素，他们将海洋分成5个真菌生物地理分布区域，即寒带(一年中最暖月份的海水表面温度 为10℃)、温带(一年中最暖月份的海水表面温度朝向地球两极处为10℃和朝向赤道处最寒 冷月份为17℃)、亚热带(一年中最寒冷月份的海水表面温度在17℃和20℃之间)、热带(赤 道两边一年中最寒冷月份的海水表面温度为20℃)和南极带(同寒带)。 生活在I司一海域里的海绵，其体内微生物的组成是否随海水温度的变化而发生改变?为 了解海水温度可能对海绵体内微生物的影响，我们采用16SrDNA的限制性酶切片段长度多态 性(ARDRA)银染分析方法[3】，对生长在三月、七月的厚指海绵Pachychalinasp．体内真细菌 的多样性进行了研究。 l材料和方法 由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，UNIQ．10柱式DNA胶回收试剂盒购自上海生工 生物T程技术服务有限公司合成：pGEM—T载体为Promega公司产品；银染试剂为国产分析纯。 1．2样品采集用灭菌的自封袋在海水深度8．10米处，分别于同年3月、7月在湛江海域采集 海绵材料，当时海水温度分别为15℃和30C，天气晴好。经中国科学院海洋研究所鉴定为厚 指海绵Pachychalinasp．。 基闵组DNA。 1．4 16S rDNA的PCR扩增反应根据古菌16S rDNA的保守序列，合成一对古菌特异性引物 (通用引物)： DNA)用限制性内切酶Alu口，37℃处理lh，然后60℃处理15rain。 作者简介：方蒋光(1975．)，男，主要从事南海海域海洋微生物方向的研究。Tel：86—898 E．maihabslont@hotmail．com 福建覆n 第三届海洋生物肓技术论坛 2005．08．19-23 1．5隆、转化、酶切和银染PCR扩增产物使用DNA快速纯化回收试剂盒进行纯化，再与 两端的引物T7和SP6进行PCR扩增反应。扩增产物在1．2％琼脂糖凝胶上进行电泳，用 将酶切反应产物在6％聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，采用两步银染法进行银染。 2结果 2．1DNA提取和PCR扩增 本实验从海绵体内提取得到了比较满意的细菌总DNA，DNA大小约为21．0kb。用通用引 物27F和1510R在含真菌基因组DNA模板的反应体系中扩增得到了目的片段，而在用内切 酶Alu I处理过的对照中扩增不出这一条带，说明无明显非特异性扩增现象，而且所扩增到的 16S 物盯和SP6之间的DNA片段大小约为209bp，图2)。 16S 图1真细菌16S 图2 rDN