热应激下中国明对虾肌肉组织+hsp70+mRNA的表达研究.pdf

中国甲壳动物学会编辑 甲壳动物学论文集 第四辑 讲辞虫盥站2003年出版 THE CRUSTACEANs(X：IETYNo．4 TRANSACTIoNSOF CHlNESE PP．452～457 热应激下中国明对虾肌肉组织 mRNA的表达研究’ hsp70 焦传珍l、2王在照1张成松1 李富花1 相建海1 摘要：hsp70基因是广泛存在于生物界的最为保守最为重要的基因之一。我们以管家基因 3一actin为内标．利胃半定量RT．PCR方法，研究了中国明对虾hsp70在不同温度及不同热 休克时间的对虾肌肉组织的转录表达水平。结果表明，处于22℃的中国明对虾肌肉组织 hsp70 mRNA水平在热应激1～6小时内呈持续增加趋势，到第6小时达到实验组的最高值。从第 mRNA水平都高于热应激前的水平。本文所趼 12小时到168小时(7天)．各实验组hsp70 究的中国明对虾hsp70存在组成性的转录表达，在热休克下该hsp70转录水平增加，显示 该基因不仅是维持细咆正常生命活动所必须的，而且可能通过可诱导的表达．参与中国明 对虾对突然出现的不良环境产生适应或耐受性。 关键词：中国明对虾热休克蛋白hsp70半定量RT—PCR 热休克蛋白(HSPs)是进化上高度保守、功能上至关重要的一族蛋白质，它广泛 存在于从低等原核生物到高等哺乳动物的整个生物界。正常情况下，热休克蛋白参与蛋 eta1．， 白质代谢、细胞局期调控、细胞凋亡等重要的生命活动(综述见Morimoto and 1990；Hightower，1991；Hendrick 胞或生物体受到接近致死的高温刺激时，大部分基因的转录表达和翻译被关闭，相反， 热休克蛋白家族成员基因高效表达，从而合成大量这类蛋白。热休克蛋白的大量合成有 利于生物体抵抗高温刺激造成的损伤。除热休克外，其他因素如缺氧、重金属离子、感 染、饥饿、创伤、代谢毒物等也会诱导热休克蛋白的高表达，从而使生物体抵抗这些不 良刺激的损害。热休克蛋白按同源性及分子量大小可分为三个主要家族：HSP90(85～ 家族最为保守。研究的也最为广泛。HSP70的机体保护功能已由大量的研究报道所证 et 实(Juliann (Parsellet et et a1．，1993；Morimotoa1．，1998；Basua1．，2002)。 chinensis)是我国最有经济价值的海水养殖种类之一， 中国明对虾(Fennropenaeus G2001AA621120号；国家自然科学基金主任基金资助项目。 ·454· 气候变化如台风、暴雨、寒潮等会剧烈改变养殖对虾的生长环境，导致诸如对虾白斑杆 状病毒(WSSV)病的大规模爆发流行，造成对虾养殖业重大损失(何建国，2001)。 住这种背景下，对虾热休克蛋白及其功能的研究显得尤为重要。迄今为止，对虾hsp70 的研究尚未见报道，我们根据本实验室所测中国明对虾EST序列，克隆并测定了中国 明对虾一种hsp70 mRNA水平的影响，为查 术，研究了不同温度及不同热休克时间对中国明对虾hsp70 清hsp70在中国明对虾中作用的机制奠定基础。 材料和方法 1．材料 于2002年10月29日，从青岛上马镇的对虾养殖场购回中国明对虾，暂养于中国 科学院海洋研究所生物培育楼8吨水族缸中。水温控制在15X2左右，盐度为2-I‰．早 晚投喂沙蚕或配合饲料各一次，每天换水1／2左右。 2．主要试剂 RNA提取用试剂、Taq