原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
第 三章_核_酸( 三)
* * 第三章 核 酸（ 三） 生物分子之二 六、核酸碱基顺序的测定 * 六 、核酸碱基顺序的测定 1、DNA碱基顺序测定方法 基本步骤： A、DNA片段的制备 利用限制性内切酶技术选择性地在某些特定位点将DNA链切断，产生能够用于测定的较小片段。 B、DNA片段的碱基顺序测定 Maxam-Gilbert法（化学降解法） Sanger法（末端终止法） 获得DNA小片段的方法 * 1）Maxam-Gilbert（化学降解法） 原理：选择性地切断某种特定核苷酸所形成磷酸二酯键，得到不同链长的DNA小片段, 然后进行电泳分析和碱基顺序推测。 DNA小片段制备（单链DNA） * 注意： 1）选择性水解后，水解位点上的含氮碱基都消失了； 2）水解反应都是不完全的，得到的是不同长度的DNA片段混合物 * * * 硫酸二甲酯（G）： *ACTTCG *ACTTCGACAG 甲酸（A）： *A *ACTTCG *ACTTCGA *ACTTCGACA *ACTTCGACAG 肼/NaCl（C）： *AC *ACTTC *ACTTCGA C *ACTTCGACAG 肼（T）： *AC *ACT *ACT T *ACTTC *ACTTCGAC *ACTTCGACAG 32P *ACTTCGACAG 待测样品需分为四份 * 将这个DNA单链片段的5’端进行标记 ↓ 用4种特异性化学试剂进行不同步断裂 ↓ 电泳分离各产物 ↓ 放射自显影 ↓ 直读DNA序列 总结化学降解法 端位碱基不能直接读出，需要特殊端基分析方法确定，例如控制合成互补链的方法！ * 2）Sanger法（末端终止法） 英国 Sanger 1955 确定牛胰岛素结构， 1958 获诺贝尔化学奖1975 设计出DNA测序法， 1980 获诺贝尔化学奖 合成一段与待测DNA序列互补的DNA片段群 * dNTP: dATP, dGTP, dCTP,dTTP * * DNA互补链的合成 引物 * DNA互补链的合成 * dNTP作放射性标记 * 3）DNA序列分析仪： 四色荧光基团标记的dNTP 以荧光标记物代替同位素标记 * 2、RNA碱基顺序测定方法 在DNA测序方法基础上发展的RNA测序法 主要 待测RNA链 与RNA互补的DNA DNA碱基顺序 RNA的碱基顺序 逆转录酶 Sanger （模板）
文档评论（0）