高中生物选修三__基因工程的基本操作总汇.ppt

1、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 ①特点: 农杆菌转化法： （1）将目的基因导入植物细胞 能感染双子叶植物和祼子植物,对大多数单子叶植物没有感染能力 ②过程： Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 ③适用生物： 双子叶植物、祼子植物。 Hin d限制性酶ⅠⅡ Hin dIII Hin dIII 目的DNA Ti质粒 苏云金杆菌 构建表达载体 Bt毒素蛋白基因 苏云金杆菌 DNA连接酶 T-DNA (可转移-DNA) 知识拓展 农杆菌转化法的过程： 基因枪法： 利用压缩气体产生的动力 ，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法 ①操作方法： ②金属粒： 将目的基因导入单子叶植物细胞 钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um 。 ③适用：单子叶植物 适用于 单子叶植物 基因枪法 花粉管通道法： 将目的基因导入植物细胞 ①操作方法： ②特点： 在植物花受粉后，花粉形成花粉管还末愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含目的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞 十分简便经济 ③例： 转基因抗虫棉 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 花粉管通道法 适用于 被子植物 ①细胞类型： ②操作程序： ___显微注射法： （2）将目的基因导入动物细胞 发育成新性状动物 移植到子宫或输卵管 培养成早期胚胎 显微注射 取受精卵（体内或体外 受精） 提纯含目的基因表达载体 受精卵 ③常用法： ②常用菌： ①微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 ④过程： 大肠杆菌 Ca2+处理获得感受态细胞 Ca2+处理 大肠杆菌 感 受 态 细 胞 表达载体 与感受态 细胞混合 感受态细胞 吸收DNA ___感受态细胞法 （3）将目的基因导入微生物细胞 （3）.将目的基因导入微生物细胞 大肠杆菌细胞最常用的转化方法是: 首先用Ca2+ 处理细胞,以增大细菌细胞壁的通透性,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞. 第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程. 第二步目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 四 目的基因的检测与鉴定 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组 DNA分子吗？ 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持 和表达？ 不一定，需要检测 1.检测方法： 分子杂交技术： （1）DNA分子与DNA分子的之间杂交 （2）DNA分子与RNA分子的之间杂交 （3）蛋白质分子（抗原与抗体）之间杂交 2.个体生物学水平的鉴定： 抗虫、抗病接种实验，活性比较实验 * 1.2 基因工程的基本操作程序 补充：1.原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片段，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.(以模板转录然后脱落) ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 2.真核细胞的基因结构 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点等。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 都由能够编码蛋白质的______和具有