甜菜黑色焦枯病毒的基因组功能分析.pdfVIP

为代表的运动蛋白MP瓜NA结合体形式和以豇豆佗叶病毒(CPMV)为代表的 管状结构形式是两种最主要的胞间运动形式。有关蛋豆萎焉病毒2所在蚕豆病毒 属(Fabavirus)的胞间运动机理迄今尚不明了。我们对BBWV2中国分离物B935 侵染的豌豆和蚕豆进行了详细的超微结构观察，得到了～些涉及病毒胞间运动和 长距离转运的超微结构证据。 甜菜黑色焦枯病毒的基因组功能分析 厩雪峰，曹云鹤，朱永翔，韩成贵，李人伟，于嘉林 (中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 北京100094) blackscorch 以甜菜黑色焦枯病毒∞eet virus，BBSV)侵染性全长cDNA克隆 技术，对BBSV不同基因的功能和基因组表达策略开展了反向遗传学研究。 通过对编码区核苷酸的替换、移码和缺失突变，证实了位于基因组5’端的 和P82基因的终止密码子点突变和移码突变在接种后可以发生低频率的回复突 变，从而产生零星的病斑；而P22和P82基因的大片段缺失突变体则无法回复。 通过起始密码子的点突变和引入提前终止密码子，对由计算机推导而来、位 功能分析。结果发现，其中对P5编码框的突变没有对BBSV侵染苋色藜 (Chenopodium 产生任何影响；而对P7a、P7b或P5’编码框的类似突变改造则将导致BBSV接 种苋色藜后的局部枯斑症状消失，且体内病毒RNA的积累水平明显降低。 进一步采用GFP替换BBSV外壳蛋白(CP)的标记试验和PI染色实验证明， 在激光共聚焦显微镜下，对P7a、P7b或P5’中任何一个编码框的突变改造都将 导致绿色荧光被局限在单个接种细胞的细胞核内，而野生型BBSV所携带的GFP 则可在多个相邻细胞的细胞核及细胞膜中同时得到表达。结合以往关于BBSV CP基因的研究结果，由此确认BBSV基因组可能共计编码6种蛋白质，包括与 现。 在此基础上，对BBSV多顺反子基因组的表达策略进行了初步研究。以纯 化的BBSV双链RNA为模板，经5-RACE和体外转录物单核苷酸突变确定了 56 BBSV在复制过程中产生的两条亚基因组RNA(SubgenomicRNA，sgRNA)的 三种蛋白，并由此决定了BBSV接种苋色藜后的细胞间运动及枯斑症状：而 sgRNA2则负责CP的表达，对病毒侵染寄主后的症状及RNA积累水平没有明显 影响。 利用甜菜黑色焦枯病毒表达的轮状病毒Ⅵ)6亚单位食用 疫苗诱导小鼠产生具免疫保护作用的抗体 周勃，王献兵，董江丽，曹云鹤，原雪峰，韩成贵，李大伟，于嘉林 (中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京100094) blackscorch 以甜菜黑色焦枯病毒(Beet 替代BBSV的外壳蛋白(CP)基因，用该重组病毒的体外转录产物机械接种BBSV 的枯斑寄主苋色藜(Chenopodium 的总RNA及蛋白，利用RT-PCR或Western 录和蛋白表达情况进行检测。在此基础上，利用间接ELISA的方法对不同批次 接种叶片中VP6蛋白的表达量进行了测定，数据统计结果表明，发病苋色藜叶 片中，VP6蛋白的含量平均值可达植物总可溶性蛋白的0．25％。 分别采集苋色藜健康叶片和接种表达sVP6的叶片，粗提取并浓缩叶片中总 可溶性蛋白，辅以CpG免疫佐剂灌胃免疫6．8周龄的BALB／c母鼠。初免后的7 周中，对小鼠的唾液、粪便及肠道粘膜IgA及血清IgG进行了间接或双抗夹心 ELISA的检测。结果表明，与对照组小鼠相比，处理组小鼠无论粘膜IgA还是 体液IgG均显示出明显的抗体发生趋势。 用猿轮状病毒SA．11株对受免母鼠所产乳鼠进行攻毒实验，结果表明，在相 同的攻毒剂量下，与对照组相比，免疫组母鼠所产小鼠在攻毒后几天中致病率明 显下降，腹泻症状较轻且症状持续时间相对缩短。这些研究结果表明，被免疫母 鼠体内由VP6亚单位植物食用疫苗所产生的非中和性抗体可以经被动免疫过程 传递至子代，并为仔鼠提供异源交叉保护。以上结果为利用植物作为生物反应器， 生产轮状病毒的可食用疫苗提供了新的技术途径和材料基础。