皱纹盘鲍外套膜组织cDNA表达文库的构建及质量鉴定.pdfVIP

疆毽羹n 第三屠南洋生糟育技术论坛 2D05．n8』9-23 皱纹盘鲍外套膜组织cDNA表达文库的构建及质量鉴定+ 李静张文兵宰麦康森 (中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室，青岛266003) 7 endofRNA mechanismat5 transcript)技术，构建了皱纹盘鲍 摘要：采用SMART(switching (HaliotisdiscushannaiIno)外套膜组织的全长cDNA表达文库。按Trizol试剂盒的操作程序提取 皱纹盘鲍外套膜组织总RNA，以此为模板，通过Power Script逆转录酶逆转录合成第一链 I酶切和Chroma Spin400柱分级分离后，与LTripEx2载体进行连接，体外蛋白包装，即获 4x 109pfu／mL。 关键词：皱纹盘鲍：外套膜；cDNA文库：贝壳生物矿化 丹IJ吾 探讨贝壳的形成机制不仅已成为生物矿化学的研究中心，同时也引起了材料学界日益浓 厚的兴趣，为纳米材料、矿物质聚合材料和模板品体等新材料的开发开启了一个新的思路¨’21。 在贝壳生物矿化过程中起决定性指导作用的是可溶性贝壳蛋白质。目前国际上围绕可溶性贝 壳蛋白质的研究已有许多报道，但这些研究是通过分析蛋白质对CaC03晶体沉积进行调控的 结果来探讨可溶性贝壳蛋白质的功能，这些功能包括调控方解石和文石晶体的核化、生长、 物相转换和品体形态等【3】。但是可溶性贝壳蛋白质的确切功能，以及决定这些功能的机制仍 不清楚。成功地阐明决定贝壳生物矿化的分子机制是快速、大量获得可溶性贝壳蛋白质、人 ]二合成新型材料、体外培育优质珍珠的理论前提。洲此近tF来，探讨贝壳生物矿化的分子机 制已成为生物矿化学的重要分支，I司时也成为了新的研究热点。目前该方面的研究还比较少， fucata和P．maxima【4缶J，等等。其中对珠埘贝的研究较为成熟。 有关鲍鱼贝壳生物矿化的分子机制的研究共少，目前只有在红鲍(Haliotis rufescens)上 discushannai 有相关的报道【7】。皱纹盘鲍(Haliotis Ino)是我国黄渤海I爻I重要的海洋生物资源， 也是我国北方的主要海水养殖贝类。皱纹盘鲍贝壳色彩优美，鲍珠是比普通珍珠更加名贵的 装饰品，I仃且鲍壳具有较高的药用价值。本研究拟采用SMART技术构建皱纹盘鲍外套膜组织 的cDNA文库，为探讨鲍壳有机基质的组成和结构，筛选与皱纹盘鲍贝壳生物矿化有关的目 的基l大I，从分子水平上阐明贝壳生物矿化的作用机制提供基础数据。 +周家高技术研究发展计划(863计划)资助，项目编写。：2001AA628080，2004AA628100 +通讯作者：张文兵E-mail：zwbl89@yahoo．corn．cn 福毽In 第三届海洋生物膏技术论坛 2005。08．19-23 l材料与方法 1．1材料 1．1．1皱纹盘鲍外套膜组织来源： 皱纹赣鲍-J：2004年6月购自青岛台东水产品市场，选择健康的个体，壳长7厘米左右。 1．1．2 A,TriplEx2噬菌体载体： 可插入长片段的外源cDNA，购自 全长42．3kb，含lacZ基I到和驴I酶稀有酶切位点， Clontech公司。 1．1．3宿主菌： E．coliXLl．Blue大肠杆菌株，带有四环素抗性基l矧，含D．2半乳糖：皆酶，可作蓝白斑筛 选，能表达克隆基蚓，可用。1：免疫筛选，购白Clontech公司。 l。l。4主要试剂与仪器： RNA