显微成像方法与技术.pptxVIP

（十）激光扫描共聚焦显微境 激光扫描共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope，LSCM）在荧光显微镜成像基础上加装激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，使用紫外或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，在亚细胞水平上观察Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化，成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域中强有力的研究工具。 随着计算机、光学显微镜、大数值孔径物镜、高分辨率分析显示、激光源、激光功率、高敏感度探测器、声光转换电子控制和各种荧光标记物的发展，使得LSCM向更精、更快、多维和无损伤性分析的方向发展。 传统的光学显微镜使用的是场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰；激光扫描共聚焦显微镜利用激光扫描束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面上的每一点扫描，标本上的被照射点在探测针孔处成像，由探测针孔后的光电倍增管（PMT，photoelectric multiplier tube）或冷电荷耦合器件（cCCD，cooled charge-coupled device）逐点或逐线接收，迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面以外的点不会在探测针孔处成像，这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面，克