06-微生物本科实验6.pptVIP

实验六 1.病例一：血标本鉴定--革兰染色，血浆触酶试验、凝固酶试验（操作，每组一份） 2.病例一总结 4.病例二：双糖铁培养基接种（操作，每组一份） 3.白喉杆菌，麻风，结核分枝杆菌（示教镜），结核菌落 5.病例三讨论 6.痰标本抗酸染色（操作，每组一份） 病例一 血标本鉴定 1.观察菌落特征 2.革兰染色 触酶试验 血浆凝固酶试验 革兰染色 1.涂片制备：涂片 干燥 固定 2.染色 (1)初染 结晶紫,1min (2)媒染 碘液,1min (3)脱色 95%乙醇,30sec (4)复染 稀释复红,1min 结果观察 触酶试验 原理? 本试验是检测细菌有无触酶的存在。过氧化氢的形成看作是糖需氧分解的氧化终末产物，因为H202的存在对细菌是有毒性的，细菌产生酶将其分解，这些酶为触酶(过氧化氢酶)和过氧化物酶。??? ??? 触酶试验 H2O2 过氧化氢酶 H2O+O2 方法：1.取菌环取一环待检菌，置于玻片上， 另取一环链球菌作为对照 2.分别滴加3%H2O2，观察有无气泡产 生，有气泡产生为触酶试验阳性，无 气泡为阴性 血浆凝固酶试验 血浆 纤维蛋白原（液态） 纤维蛋白（固态） 凝固酶 试管中血浆发生凝固（游离型） 致病性葡萄球菌 结合型凝固酶 血浆中纤维蛋白原 细菌的纤维蛋白原受体 细菌凝聚 （玻片法） 方法及结果 1.玻片法：血浆，生理盐水--金葡菌 细菌在血浆中聚集成团块，无法混匀为 血浆凝固酶阳性，反之细菌在血浆中呈 均匀混浊为阴性 2.试管法：血浆--待检菌肉汤培养物，凝固酶阳性、 阴性株肉汤培养物，37℃，3h 细菌使试管内血浆凝固呈胶冻状为阳 性，反之，试管内血浆不凝固仍流动为阴性 病例一总结 革兰染色 触酶试验 血浆凝固酶试验 结论： G+球菌 触酶试验 + — 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌 血浆凝固酶阴性葡萄球菌 链球菌属 病例一检查流程 血液 增菌培养 涂片染色镜检 血平板培养 药敏试验 涂片染色镜检 初步鉴定 血清学鉴定 测定抗体 生化鉴定 药敏试验 病例二双糖铁培养基、半固体培养基接种 1.粪标本分离结果示教 2.斜面+穿刺接种法： 标记处取菌，取菌落中心处，37℃孵育，次日看结果 呼吸道感染细菌形态示教 1.白喉棒状杆菌 2.结核分枝杆菌 3.麻风分枝杆菌 4.结核菌落 5.白喉棒状杆菌血碲盐菌落 白喉毒力试验 原理：毒素与抗毒素在琼脂内扩散相遇而形成沉淀 材料： 蛋白胨肉汤琼脂培养基 白喉棒状杆菌24h培养物 白喉抗毒素 奈瑟染色（Neisser stain） 第一液：美兰，酒精，冰醋酸 第二液：俾士麦褐 用第一液染3min，水洗后，再以第二液染1min。水洗，晾干，油镜观察。 病例三 患者：男性，32岁，因午后低热，盗汗，乏力，食欲不振，消瘦。于1996年6月入院。 查体：体温38.2。C，左上肺叩诊浊音，左上肺呼吸音减弱。白细胞4.79（4~10）x109/L。分叶核细胞占61（50-70）%，淋巴细胞22（20~40）%。单核细胞13（3~8）%，嗜酸细胞4（0.5~5）%，红细胞沉降率（ERS）92（0~15）mm/h。 问题： 1．该患者可能患了什么疾病？需与哪些疾病作鉴别？ 2．如何进行微生物学检查与治疗？ 病例三讨论 初步诊断： 诊断依据： 拟作检查： 可能结果： 标本： 痰 集菌：4%NaOH，15min — 离心沉淀（痰、尿、 粪 等含杂菌标本，杀菌、溶解粘稠物） 染色镜检：标本直接涂片、集菌后涂片，抗酸染色 培养法：集菌后标本接种于罗氏培养基，37℃， 3-4W，抗酸染色 其他：动物试验，细菌核酸检测 痰标本抗酸染色 1. 涂片，晾干，固定 2. 石炭酸复红液染色（9%，5min） 3. 3%盐酸酒精脱色，1min左右 4. 吕氏美兰复染，1min 罗氏培养基 含有分枝杆菌生长繁殖所需的基础物质、营养物质和抑制杂菌生长的抑菌剂。基础物质包括谷氨酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁、柠檬酸镁、丙三醇和水分，营养物质主要为鸡蛋，它们能为细菌的生长繁殖提供无机盐、碳源、氮源和水分，镁、钾元素有调节菌体渗透压的作用，使分枝杆菌细胞膜具有良好的通透性。蛋黄