第10章+DNA的生物合成.pptVIP

生物化学 ～第三篇～ 第三篇 DNA的生物合成 RNA的生物合成 蛋白质的生物合成 基因表达调控 基因重组与基因工程 基因（gene）： 基因就是具有生物学功能的DNA片段。 中心法则（the central dogma）： 大多数生物的遗传信息的传递的方向和规律 生命科学的最基本原则 中心法则里三个主要概念 复制（replication）：以亲代DNA为模板，合成子代DNA，将遗传信息准确的从亲代传递给子代。 转录（transcription）：以DNA单链为模板，合成与DNA某段碱基序列互补的RNA分子，将遗传信息从 DNA传递给RNA的过程。 翻译（translation）：以mRNA为模板，指导蛋白质的生物合成，由mRNA链上的遗传密码决定蛋白质的氨基酸顺序，这一过程被称为翻译。 基因表达： 通过转录和翻译，基因的遗传信息在细胞内合成了具有各种生理功能的RNA或蛋白质 中心法则的补充 逆转录（reverse transcription） 1970年，Temin和Baltimore分别从RNA病毒中发现 以RNA为模板指导DNA的合成 DNA是遗传的物质基础 1944年，Avery将有毒型肺炎双球菌DNA与无毒型肺炎双球菌一起培养，结果使无毒型肺炎双球菌转变为有毒型肺炎双球菌。其原因就是有毒型肺炎双球菌DNA进入无毒型肺炎双球菌中，引起其遗传性状改变。 Avery的肺炎双球菌DNA转化实验 第十章 DNA的生物合成 生物体的DNA合成包括三个方面： 以DNA作为模板指导的DNA合成称为复制，即将DNA携带的信息传至子代DNA。 第一节 DNA复制的基本特征 DNA的复制 DNA复制的特点 半保留复制 双向复制 复制的半不连续性 1. 半保留复制（semiconservation replication） 定义：复制时，母链DNA解开成两股单链，各自作为模板（template）指导子代合成新链。子代细胞DNA双链中，一股是从亲代完整的接受过来，另一股单链则是完全重新合成。由于碱基互补，两个子细胞的DNA双链都和亲代DNA碱基序列一致。 半保留复制的实验证据 1958年，M. Messelson和F. W. Stahl用实验证实 半保留复制的意义 遗传的保守性：代与代之间DNA碱基序列的一致性，使子代保留了亲代DNA全部的遗传信息，是物种稳定性的分子基础。 2. 复制的方向和方式 双向复制 （bidirectional replication）：从固定的复制起点开始，同时向两个方向进行复制（最常见的） 复制叉 复制时，母链DNA解链成两个单链，各自作为模板，子链沿着张开的模板进行延伸，形成的Y型结构，称为“复制叉” 有特定的起始点 原核生物只有一个复制起点 真核生物有多个复制起点 真核生物有多个起始位点 3. 半不连续复制 因体内仅含催化5→3 DNA合成的聚合酶。 冈崎片段（Okazaki fragment） 60年代，冈崎首先在电子显微镜下，利用放射自显影技术观察到 3. 半不连续复制 领头链(leading strand):顺着解链方向生成的子链，复制是连续的。 随从链(lagging strand):复制方向与解链方向相反，需要等待解开足够长度的模板链才能进行复制，得到不连续的片段(冈崎片段)。 3. 半不连续复制 3. 半不连续复制 领头链的连续复制，和随从链的不连续复制，就是复制的“半不连续性”。 第二节 DNA复制的酶学和拓扑学变化 底物（dNTP） DNA聚合酶 模板（母链） 引物（RNA短片段） 其它酶类和蛋白因子 DNA复制相关的酶系 DNA聚合酶 解旋酶 拓扑异构酶 单链DNA结合蛋白 DNA连接酶 二、 DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶（DNA-dependent DNA polymerase） 缩写：DNA-pol 活性：5’ →3’聚合酶活性 外切酶活性 1、原核生物的DNA聚合酶 DNA-pol I 1958年，A. Kornberg在大肠杆菌里面首次发现，所以命名为DNA-pol I DNA pol I 的校读功能（1） DNA pol I 的校读功能（2） 原核生物的DNA-pol III 是真正催化新链合成的酶 2. 真核生物的DNA聚合酶（αβγδε） DNA-polα起始引发 DNA聚合酶共同特点 以dNTP为底物 具有模板依赖性，严格遵循碱基配对规律 聚合方向为5’→3’，催化核苷酸以3’，5’-磷酸二酯键相互连接 需引物提供游离的3’-OH，不能从头合成DNA链 （一）核酸外切酶活性在复制中辨认切除错配碱基并加以校正 核酸外切酶(exonuclease)是指能从核酸链的末端把核苷酸依次水解出来的酶，外切酶是有方向性