TBE-300B型高速逆流色谱分离仪试题.ppt

定期清洗维护 仪器在正常使用一段时间后，分离管柱的内壁可能会附着一些样品沉淀物，这些沉淀物一旦被溶剂洗脱落，会影响样品的分离程度并造成管柱堵塞，以致管柱破裂，所以，正常使用中的仪器推荐定期清洗分离管柱，以防止上述现象的发生。定期清洗分离管柱的过程如下： 配制0.5%的稀氢氧化钠溶液60ml，用泵泵入分离管柱内，停泵，用气体将氢氧化钠溶液缓慢吹出管柱。 用泵把100ml约85℃的热水泵入管柱内，以清洗管壁上残存的碱液，停泵，然后用气体将水缓慢吹出管柱。 重复第2步2-3次，以达到完全清洗氢氧化钠溶液的目的。 用泵把大约100ml的分析纯乙酸泵入管柱内，停泵，用气体把乙酸缓慢吹出管柱后，结束。 注意事项： 整个清洗过程中应打开循环水浴（保持一定温度），再设定泵压力保护值为2Mpa. 不可用饱和的NaHCO3溶液，以防析出晶体堵塞管柱。 在第三步清洗后若清洗效果不理想，可重复第3步1-2次，以吹出液透明 若以上步骤不可达到清洗的目的，可适当更换清洗液（乙醇、氯仿等），以达到清洗目的。 在正常使用过程中的仪器，推荐每隔三个月的时间应进行一次彻底清洗。 主机内的连接管正常使用一年后可按实际情况注意更换；进出口管子易损部位建议每半年维护保养一次。 附：固定相保留率的计算 （1）主机分离管路体积的测定 用量筒取500ml固定相，用泵泵入主机管路内，当固定相从管路的出柱口流出后，继续泵至固定相流出20ml，停泵，记下量筒内剩下的固定相体积，及收集到的流出上相的体积。 总体积的计算 V总 = 500-V剩余-V流出 式中: V总 ——管路测定总体积 V剩余——泵入一定体积的固定相后，剩余在量筒中的固定相体积（ml） V流出——流出固定相的体积（ml） (2)固定相保留率的测定 以900 r/min的转速正向或反向旋转已被固定相充满管路的主机，同时以3 ml/min的流速往分离管路内泵入流动相，当主机出柱口管路流出流动相后，量出被流动相推出的固定相体积（V出）。 固定相保留率的计算=(V总-V出/V总-V环 ) X 100% 式中： V--管路总体积（ml） V--被流动相推出的固定相的体积（ml） V—进样环的体积（ml） *固定相的保留率大于等于40%为合格 Thanks! TBE-300B型高速逆流色谱分离仪 2015.01.06 目录 高速逆流色谱发展历程 高速逆流色谱原理及应用 溶剂体系的选择 系统组成及流路连接 仪器的操作 常见问题及解决方法 定期清洗维护 高速逆流色谱发展历程 高速逆流色谱 ( high -speed counter -current chromatography , HSCCC ) 是由美国国立卫生研究院 (National Institute of Health, NIH ) 的 Yoichiro Ito博士于20世纪80年代发明的一种基于液-液分配机理的新型色谱分离纯化技术。高速逆流色谱用于天然药物化学成分的分离始于1985年,到1988年、1989年达到一个高潮, 期间发表了大量的文章。经过几十年的实验研究, 特别是近十多年高速逆流色谱的发展, 使得它在生物工程、 医药、生化、植化、农业、化工、环境、海洋科学 、无机化学等广泛领域显现出越来越高的实用价值。 我国还是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家, 也是世界上高速逆流色谱仪生产国之一。HSCCC被北京新技术应用研究所的张天佑教授和上海同田生化技术有公司的邓秋云先生进一步改进。 引用文献： 姚舜, 柳仁民, 黄雪峰,等. 高速逆流色谱在天然产物分离中的方法学研究[J]. 中国天然药物, 2008, 6(1) : 13-19. 高速逆流色谱原理 高速逆流色谱(high-speed counter-current chromatography, HSCCC）是一种连续高效的液 - 液分配色谱技术。由于不需要固体支撑体, 物质的分离依据其在互不相溶的两相液体中的分配系数的差异而实现, 因而避免了固体固定相不可逆吸附而引起的样品损失、 失活、 变性等问题, 样品回收率高, 回收的样品更能反映其本来的特性, 特别适合于天然产物中有效成分的分离。 利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），此时在螺旋柱中任何一部分, 两相溶剂反复进行着混合和静置的分配过程，流动相不断穿过固定相, 随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的大小次序，被依次洗脱