微生物的实验室培养复习课件讲义.pptVIP

（六）鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培养基：加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存 1、酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 2、伊红—美蓝培养基：鉴定大肠杆菌 原理：代谢产物与伊红—美蓝结合→ 菌落呈黑色并带有金属光泽。 CO(NH2) 脲酶 + CO2 NH3 + H2O 属鉴别培养基，它并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长 操作 实验组 对照组 判断培养基中是否有杂菌污染 判断选择培养基是否具有筛选作用 选择培养基 接种 选择培养基 不接种 选择培养基 接种 牛肉膏蛋白胨培养基 接种 需将未接种的选择培养基同时进行培养 需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目、进行对比得出结 金版P21 实验设计原则 (1)设立重复组： 统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布三个平板作重复组，增强实验结果的说服力与准确性。 (2)设立两种对照组： 栏目链接 四.结果分析与评价 2 2 2.纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX酶(内切酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维二糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维素 3.纤维素的分解： 土壤中某些微生物(真菌、放线菌及细菌 )能够产生纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用。 (三)、实验设计 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别培养基 挑选菌落 什么样的环境取样? ① 培养的目的? ②选择培养基的特点? 挑选什么样的菌落? ①鉴别培养基的特点? ②如何鉴别? 根据：微生物对生存环境的要求，到相应环境中去找； 目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物； 刚果红染色法 【资料三】刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 漂洗作用,氯化钠可以使结合不牢的刚果红洗去,这样就留下大大小小的透明圈,大的透明圈当然分解纤维素的能就强。 方法一中NaCl溶液的作用？ 染色法 优点 缺点 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐 刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便 不存在菌落混杂问题 产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈， 有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 思考：这两种方法各有哪些优点与不足 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 比较项目 分解尿素的细菌 纤维素分解菌 选 择 培养 基 原理 培养基类型 目的 鉴 定 培养基 原理 现象 方法 将细菌涂布在只有 尿素做氮源的选择 培养基上 将细菌涂布在只有 纤维素粉做碳源的 选择培养基上 固体培养基 液体培养基 筛选菌株 选择培养,浓缩所需微生物 比较 项目 分解尿素的细菌 纤维素分解菌 选 择 培养 原理 培养基类型 目的 鉴 定 培养基 原理 现象 方法 在细菌分解尿素的化学反应 中，细菌合成的脲酶将尿素 分解成了氨，氨会使培养基 的碱性增强，pH升高。在培 养基中加入酚红指示剂，如 果pH升高指示剂会变红 刚果红可以与纤维素形成 红色复合物，当纤维素被 纤维素酶催化分解后红色 复合物无法形成，培养基 上就会出现以纤维素分解 菌为中心的透明圈 观察菌落周围是否有着色的 环带出现来鉴定尿素分解菌 观察菌落周围是否出现 透明圈来筛选纤维素分解菌 脲酶检测法 刚果红染色法 酚红培养基 刚果红染色法 可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 透明圈大的，分解纤维素的能力就强啦 刚果红染色法 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 四、大肠杆菌的纯化培养 分散成单个细胞, 形成单个菌落 3.功能： 单个 或少数菌体 2.特征： 大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。 鉴定菌种的重要依据 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 (菌落) 1.定义： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板： 培养基、培养皿 倒平板 约50℃ 倒置：防止皿盖上的水珠 落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 倒置 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。