线粒体COI基因序列鉴别中国东南沿海青蟹种类组成.pdfVIP

福建蠢n’ 第三届蠢洋生物高技术论坛 200s．08．19-23 线粒体COI基因序列鉴别中国东南沿海青蟹种类组成 马凌波张凤英乔振国 (中国水产科学研究院东海水产研究所，农业部海洋与河口渔业重点开放实验室， 上海，200090) 见其它种的报道。本文应用线粒体DNA(mtDNA)序列分析的方法，对我国东南沿海5个地 区的72个青蟹个体进行了种类鉴别。获得的72个细胞色素氧化酶亚基I(C01)序列与已知s COl序列的相似性达到98％以上，与锯缘青蟹的差异达9．98％一10．84％。这些序 paramamosain 列与s 遗传距离和系统进化等分析结果都表明本文研究的青蟹都是Sparamamosain，而不是锯缘青 蟹，由此推测sparamamosian；黾．青蟹属分布于我国大陆沿海地区的最主要的种类，而其余3 种青蟹即使存在，所占比例也较小。结果警示研究青蟹属相关种类时应当仔细鉴别采集样本 的种类。 关键词：青蟹，细胞色素氧化酶亚基I，种类鉴别 青蟹(Scylla)属丁甲壳纲、十足目、短尾亚目、梭子蟹科，分布于我国浙江、福建、台 湾、广东、J’．西和海南沿岸水域，同时也分布丁二东南砸、澳人利亚、日本、印度、南非等海 同1：酶和mtDNA序列分析方法，结合形态与生态学特征，最终确认从东非到印度．西太平洋 了人多数学者的认同13。91。而且这些研究还发现这4个种不仅在形态上存在一定著别，而且在 繁殖生物学、发育生物学、对不同环境条件适应性等方面都存在一定差异。 虽然在我国台湾地区也发现了这4个种的分布f8们，但是除锯缘青蟹外，还没有其它种在 中国东南沿海地区分布的报道。虽然Keenan认为分布丁二我国厦门的锯缘青蟹和香港的一样， 同为新种Scylla 都是以锯缘青蟹为对象开展生理学、繁殖学、营养学和养殖生态学等方面的研究。然而我们 在采用mtDNA序列分析的方法研究中国东南沿海5个地区的“锯缘青蟹”的群体遗传结构的过 程中，发现所获得的细胞色素氧化酶弧基I(C01)序列与＆p册删绷甜口加已知序列几乎完全相 同，却与锯缘青蟹有较人差异。这一结果提示＆paramamosain在我国东南沿海确实存在。为 资助项目：中国水产科学研究院科研慕金(2003．2．2)，农业结构调整重大技术研究专项(04一11-02B) 作者简介：马凌波(1972．)，男，福建连城人，博J_副研究员。主要从事水产生物技术研究。E-mail malingbo@sina．corn 通讯作者：乔振国(1952．)，男，}：海人，剐研究员，主要从事水产动物养殖学研究。 播建囊n 第三届海洋生橱青技术论坛 200s．08．19-23 了确定分布和养殖于我国东南沿海地区的青蟹的种类组成，本文对5个地区的72个锯缘青蟹 个体的线粒体COl序列进行测定，通过序列特征、遗传距离和系统进化分析，结果证实＆ paramamosain才应该是青蟹属分布丁．我国的最主要的种类。 1．材料与方法： 1．1材料和试剂 青蟹材料均为采集点近海区捕捞蟹苗养成个体，分别采自海南文昌(5只)(编号：hl一5) 保存备用。 1．2基因组DNA的提取 (10mmol／LTris．CI；100mmol／L 的蛋白酶K，55ll消化2．3小时，然后分别用等体积的酚，酚：氯仿(1：1)，氯仿：异戊醇(24：1) 抽提，二倍体积无水乙醇沉淀，双蒸水溶解，于4i]保存备用。 1．3mtDNA序列的扩增和测序 分别使用通jlj引物COlf署IICOlr[’31，以及青蟹属mtDNA C／N2769fb’扩增青蟹COl序列，以鉴别mtDNA序列和核插入假基冈序列。 Tris-CI， PCR反廊总体积为25pl其中包括10xPCR反应缓冲液2．5pl(成分：100mmol／L 500mmoi／LKCi，15mmol／L MgCl2，1．3mg／mi (1吼g／m1)舢hTaq酶(5U仙1)0．舢l；dNTP(各2．5