病毒学整理第一弹.doc

2 病毒的形态和结构、病毒基因组的表达 （一）病毒的形态? ： 病毒粒体（virion）：是指完整成熟的、具有侵染力的病毒。病毒的基本存在形式（形态）。 病毒粒体的主要几种形态：球状、杆状、线状、杆菌状、弹状、双联体、细丝状等。 病毒粒体的形态微小，其度量单位通常采用纳米（nm）。 （二）病毒的结构? 植物病毒粒体的基本结构： 形态单位（morphologic unit): 指一定数目的蛋白亚基以特殊方式聚集形成在电镜下可见的壳粒（capsomer).壳粒是由一种或几种病毒蛋白形成的寡聚体。 结构单位（structure unit)：衣壳由许多单个蛋白亚基或多肽链组成，蛋白质亚基又称为结构单位。 衣壳（capsid):蛋白质衣壳，指由蛋白质亚基或壳粒排列形成的有规则的壳样结构。 核衣壳（nucleocapsid):指衣壳蛋白与病毒核酸结合的复合物，还包括与核酸相联系的其他蛋白。 完整的病毒粒体是由一或多个核酸分子(DNA或RNA)包被在蛋白衣壳里构成的。 绝大多数病毒粒体都只是由核酸和蛋白衣壳(capsid)组成，但植物弹状病毒(Plant rhabdovirus)粒体外面有包膜(envelope)或囊膜包被。 1）等轴对称结构：病毒的壳体由蛋白亚基有规则地排列成一个正二十面体对称结构。多数球状病毒的结构构型。 2） 螺旋对称结构：蛋白质亚基螺旋状排列，中间是一个由核酸构成的空心管子，核酸也呈螺旋状排列，嵌入到螺旋状排列的蛋白质亚基内端。 大多数粒体为杆状、线状或有脂蛋白包膜的植物病毒具有这种对称结构。 3）复合对称结构：有些病毒粒体的蛋白质亚基排列较复杂，由等轴对称结构和螺旋对称结构复合而成。 病毒基因组的表达： 病毒基因组信息的表达的不同点主要在于:基因组转录mRNA具有多种形式；mRNA翻译蛋白有多种策略。 亚基因化（subgenomic RNA，sgRNA） 多聚蛋白切割（polyprotein cleavage） 多分体基因组（multi-partite genome） 通读翻译（translational readthrough） 移码翻译（reading frame shift） 遗漏扫描（leaky scanning） 3 病毒提纯的原理，主要试剂的作用 原理： 理化提纯：根据病毒与寄主细胞组分的理化特性差异，应用各种理化方法，去除寄主组织和细胞中的其他非病毒组分，提取出具有侵染力的浓缩的高纯度病毒。 主要试剂的作用： 植物细胞破碎:缓冲液；还原剂；去垢剂；乙二胺四乙酸（EDTA） 将植物细胞破碎目的是使其中的病毒释放出来。 使病毒处于稳定、溶解和不聚合状态。 常采用组织捣碎机或匀浆机进行，通过其中的刀片高速运转，剪切植物组织和破碎细胞。液氮来粉碎细胞, 以利病毒释放 缓冲液:1-3倍体积，pH7左右，磷酸、硼酸和柠檬酸等,0.1-0.5M 附加成分：还原剂（亚硫酸钠、巯基乙醇、抗坏血酸等抑制多酚氧化酶的活性） 病毒粒体的聚合是提纯中的重要问题之一。 去垢剂:TritonX-100、吐温-20；0.5-1M尿素，目的分散病毒粒体。 乙二胺四乙酸（EDTA）：破坏核糖体，阻止其与病毒共同沉降下来，同时还能抑制需要二价金属离子的酶的活性。 提取液的澄清 :澄清剂有氯仿、正丁醇、四氯化碳、乙醇等 氯仿：线状病毒； 正丁醇和四氯化碳：球状病毒； 澄清剂可使一些蛋白质变性，除去叶绿素和脂类物质等； 在提取液中加入镁皂土可以结合核糖体和RNase，加热或冰冻可以使寄主蛋白凝聚。 在一定的盐浓度下，聚乙二醇（PEG）可以使病毒沉淀 4 病毒的复制过程 5 病毒变异的分子机制 (1) 选择：a病毒本身；b寄主植物；c昆虫介体 进化限制系数：核苷酸非同义突变（dN）与同义突变(dS）的比率 ω = dN/dS（ω越小，表示编码的氨基酸所受到的负选择压力越大，其氨基酸序列就越保守） (2) 瓶颈效应：由于某种原因，种群内个体数目大幅度而且快速地减少。 这些瓶颈效应所导致的遗传漂变叫做奠基者效应。 奠基者效应（founder effect）：一个新的种群起始于原来种群中随机选出的一小部分变异体。 穆勒氏棘齿效应 6 病毒与寄主植物的互作，基因沉默及其应用、沉默抑制子及其鉴定 RNA 沉默(RNA silencing)或基因沉默(gene silencing)是广泛存在于植物、动物、线虫和真菌等真核生物中的一种高度保守的、序列特异的RNA 降解机制。 转录水平基因沉默（TGS）：发生在细胞核，主要由于启动子失活或组蛋白甲基化而导致基因转录无法正常进行。 转录后基因沉默(PTGS)：发生在细胞质，一般指基因能正常转录，但是转录后由于发生了核酸降解或者抑制了蛋白