草鱼E_3泛素连接酶Nrdp1基因cDNA克隆和表达分析.pdfVIP

江西农业大学学报 2013，35(1)：0171—0178 http：／／xuebao．jxau．edu．ca ActaAgricuhuraeUniversitatisJiangxiensis E—mail：ndxb7775@ sina．corn 草鱼 E3泛素连接酶 Nrdpl基因 cDNA克隆和表达分析 隗黎丽，杨竹青，王 自蕊，熊六凤，周秋 白 (江西农业大学 动物科学技术学院，江西 南昌 330045) 摘要：神经调节素受体降解蛋白1(neuregulinreceptordegradationprotein—l，：Vr@1)是一种新的E 泛素连接酶， 可调节细胞增殖和凋亡等。研究采用RACE方法从草鱼 (Ctenopharyngodonidella)肝脏 中克隆了Ⅳ 的全长 eDNA序列；采用半定量RT—PCR方法分析该基因在草鱼不同组织中表达情况。结果表明：该序列全长cDNA 大小为 1865bp(GenBank登录号：JX864048)，其中开放阅读框为954bp，编码318个氨基酸，预测分子量大小 为36．09ku，pH为7．0时理论等电点为5．83；5’和3’非翻译区的长度分别为291bp和620bp，在 3’非翻译 区发现2个mRNA不稳定信号(A盯rA)和 1个多聚腺苷酸加尾信号(A1rA【AA)。该蛋白序列没有信号肽和跨 膜结构 ，其二级结构主要以d·螺旋为主，不含B一折叠。氨基酸序列保守性分析表明，草鱼Nrdp1与斑马鱼、虹 鳟及人的同源性分别为98％、94％和89％；该基因在心脏和脑中的表达量较多，在肌肉和血液中表达很少。 关键词：草鱼；Nrdpl；克隆；表达 中图分类号：$965．112 文献标志码：A 文章编号 ：1000—2286(2013)01—0171—08 CloningandExpression AnalysisofE3UbiquitinLigase Nrdp1from GrassCarpCtenopharyngodon idella WEILi—li，YANGZhu—qing，WANGZi—rui，XIONGLiu—feng，ZHOUQiu-bai (CollegeofAnimalScienceandTechnology，JiangxiAgriculturalUniversity，Nanchang330045，China) Abstract：Xr@l(neuregulinreceptordegradationprotein一1)isanewlydefinedE3ubiquitinligaseand regulatesthecellproliferationandapoptosis．Inthepresentstudy，thecDNA sequenceofgrasscarpCtenopha— ryngodonidellaⅣr 1(gcNrdp1)consistsof1865bpwitha291bp5’untranslatedregion(UTR)anda620 bp3’UTR，withanopenreadingframeof954bpencodingthe318aminoacidswhichispredictedtohaveno signalpetptideandtransmembranehelices．ThededucedaminoacidsequenceofgcNrdplshowed98％ ，94％ and89％ ofidentitytozebrafishDaniorerio，rainbow troutOncorhynchusmykissandhumanHomosapiens Nrdpl，respectively．ThedomainsearchrevealedthatgcNrdplcontainsaRINGdomain(ataminoacids18— 56)andPfamdomain(ataminoacids137—315)．PhylogeneticanalysisdemonstratedthatgcNrdplisclus— teredinasamecladewithzebrafishandrainbow troutNrdp1