蓝细菌Synechococcus+spPCC+7942光解酶全酶重建及其辅酶研究.pdfVIP

生物技术 7942光解酶 蓝细菌Synechococcussp．PCC 全酶重建及其辅酶研究事 张连文吴庆余 清华大学生物科学与技术系，北京，100084 摘要环丁烷嘧啶二聚体光解酶是一种简单、高效的DNA修复酶，该酶利用光能修复紫外 线辐射造成的DNA损伤．在光解酶中含有两类辅酶：一类是其催化活性所必须的黄素腺嘌 呤二核苷酸(FAD)，另一类是吸收光能的光吸收天线，称作第二类辅酶．迄今为止，共发现 有三种二类辅酶，包括：黄素腺嘌呤单核苷酸(FMN)、5，10一甲叉亚甲基四氢叶酸(MTHF) 7942光解酶 和8一羟基一5一去氮核黄素(8-HDF)．本文通过蓝细菌Synechococcussp．PCC 的过表达、全酶重建，对全酶中的辅酶进行了鉴定．氨基酸序列比对结果表明蓝细菌 Synechococcus 6301光解酶一样 sp．PCC7942光解酶可能具有和蓝细菌Synechococcussp．PCC 7942光 的辅酶。光谱学研究结果确证了FAD和8-HDF在重建蓝细菌Synechococcussp．PCC 7942 解酶中的存在．光复活结果进一步证明了8-HDF在重建蓝细菌Synechococcussp．PCC 7942光解酶属于8-HDF型 光解酶中的存在．本研究结果表明蓝细菌Synechococcussp．PCC 光解酶。 关键词 分子生物学；环丁烷嘧啶二聚体光解酶；全酶重建，蓝细菌Synechococcussp．PCC 7942 引 言 太阳光中的紫外线辐射会对生物造成严重的损伤，其中广为研究的有DNA中嘧啶二聚体的形成。嘧 啶二聚体会阻断DNA的复制或转录，进而表现出对生物体生长和生存的影响【l力】。光解酶可以长波紫外线 (UVA)或蓝光的光能，迅速修复这些嘧啶二聚体，使DNA恢复到自然状态。 现已发现， 在多种生物中存在环丁烷嘧啶二聚体光解酶， 包括真细菌、 古细菌、植物、昆虫和脊 椎动物【3l。根据氨基酸序列的不同， I和classII。所 环丁烷嘧啶二聚体光解酶可以分为两种类型：class 有的光解酶都包含一个还原型辅酶FAD。它是光解酶发挥其催化活性所必须的。 除此之外， I型光解 酶还含有第二类辅酶，这种辅酶具有物种特异性，在不同的生物中，它们常常是不同的。已经发现的二类 等三种物质【4．5。61。这些物质唯一的作用就是拓宽光解酶的吸收谱或增加它在某一波长下的吸收，由于这 ‘ 些物质自身具有特定的吸收特征，从而在很大程度上影响了光解酶的吸收谱。 蓝细菌Synechococcussp．PCC7942是一类被广泛研究的模式生物，它与蓝细菌Synechococcussp．PCC 6301关系密切。关于蓝细菌Synechococcussp．PCC sp．PCC sp．PCC 7942光解酶的过表达、全酶