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加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。 在四环素类抗生素中,采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化锌钾的胶状沉淀来吸附蛋白质; 在枯草杆菌发酵液中,加入氯化钙和磷酸氢二钠,两者生成庞大的凝胶,把蛋白质、菌体及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中除去。 3. 吸附法 重力沉降 浮选 旋液分离 介质过滤 离心 通气,产生气泡,使固体附着在气泡表面除去。 用于固液比重差小、直径5~30μm颗粒的分离,污水处理 悬浮液以较高速度沿切线方向进入旋风分离器, 轻相由分离器中央排出, 重相由分离器下部排出, 但不适合直径5 μm颗粒去除(可用丝网分离器)。 工业上常用 霉菌和放线菌为丝状菌,体形较大,发酵液采用过滤方法; 细菌和酵母菌为单细胞,体形较小,其发酵液采用高速离心分离,如对发酵液进行预处理,也可用过滤进行固液分离。 二、固液分离的方法 优点:分离速度快,分离效率高、液相澄清度好; 缺点:设备投资高、能耗大。 离心机种类:碟片式离心机、管式离心机、倾析式离心机。 1. 离心分离 在液相非均一系统中,利用离心力达到液-液、液-固、液-液-固分离的方法,统称为离心分离。 离心分离因数 f= Gu2 gR G gR (2πRn)2 60 GRn2 900 = = = GDn2 1800 重量kg 旋转直径 转速r/min 微生物发酵液中含有大量菌体、细胞或细胞碎片以及残余的固体培养基成分。 过滤就是将悬浮在发酵液中的固体颗粒与液体进行分离的过程。 在过滤操作中,要求滤速快、滤液澄清,并且有高的收率。 2. 过滤 A. 根据过滤机理,过滤操作可分为澄清过滤和滤饼过滤。 澄清过滤: 滤饼过滤: 过滤介质为硅藻土、砂、颗粒活性炭、玻璃珠、塑料颗粒等,当悬浮液通过滤层时,固体颗粒被阻拦或吸附在滤层的颗粒上,使滤液得以澄清,适合于固体含量少于0.1g/100ml、颗粒直径在5-100um的悬浮液的过滤分离,如河水、麦芽汁、酒类和饮料等的澄清。 过滤介质为滤布,包括天然或合成纤维织布、金属织布、玻璃纤维纸、合成纤维等无纺布。当悬浮液通过滤布时,固体颗粒被滤布阻拦而逐渐形成滤饼(滤渣)。当滤饼至一定厚度时即起过滤作用,此时即可获得澄清的滤液,这种方法叫做滤饼过滤,在滤饼过滤中,悬浮液本身形成的滤饼起着主要的过滤作用,适合于固体含量大于0.1g/100ml的悬浮液的过滤分离。 B. 常用过滤设备 (1)板框压滤机 优点 过滤面积大,结构简单,价格低,动力消耗少, 对不同过滤特性的发酵液适应性强。 缺点 不能连续操作,设备笨重,劳动强度大,卫生条件差,非过滤的辅助时间较长。 广泛应用于培养基制备的过滤及霉菌、放线菌、酵母菌和细菌等多种发酵液的固液分离。适合于固体含量1-10%的悬浮液的分离。 单元组成 板 布 板 布 板 操作注意点 尽量使工作时间和辅助时间接近; 降低滤液粘度 (2)真空转鼓过滤机 (3)硅藻土过滤机 (3)硅藻土过滤机 1)切向流过滤(Cross-Flow Filtration)又称错流过滤 交叉过滤和十字流过滤,是一种维持恒压下高速过滤的技术。其操作特点是使悬浮液在过滤介质表面作切向流动,利用流动的剪切作用将过滤介质表面的固体(滤饼)移走。 2)双水相萃取 向水相中加入溶于水的某些高分子化合物(如葡聚糖、聚乙二醇等)后,形成密度不同的两相,轻相中富含某种高分子化合物,重相中富含盐类或另一种高分子化合物,从而达到分离和提纯某种高分子化合物的目的。 3)吸附法 向细胞碎片悬浮液中加入某种固体吸附剂,或者用细胞碎片悬浮液通过装有吸附剂的固定床,即可达到除去细胞碎片的目的。主要的问题是很难选择合适的吸附剂,以保证目的产物不被吸附而损失。 3. 其他固液分离方法 思考题: 1.为什么要进行发酵液预处理? 2.絮凝和凝聚的定义和区别。常用的絮凝剂 3.发酵液分离的主要方法. 4.分离和过滤的主要设备有哪些? 模块二:相关的分离纯化技术子模块一:原料的预处理技术 复习提问 简述糖酵解的意义? 1mol葡萄糖彻底氧化生成多少ATP? 新课导入 我们如何从生物体中提取出生物活性大分子? 生物技术下游加工过程的一般流程和单元操作 培养液(发酵液)的预处理和固液分离; 初步纯化(提取); 高度纯化(精制); 成品加工。 一般下游加工过程可分为4个阶段 下游加工过程的一般流程 (沉淀、吸附、萃取、超滤、结晶) 发酵液 初步纯化 细胞碎片分离 细胞破碎 细胞分离 高度纯化 成品加工 预处理 胞外产物 (加热、调pH、絮凝) (过滤、离心分离、膜分离) (匀浆、研磨、酶解) (离心分离、双水相萃取、膜分离) (重结晶、离子交换、色谱分离、膜分离) (浓缩、无菌过滤、干燥、成型) 胞外产物 提取 精
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