两种不同的检验方法检测乙型肝炎病毒标志物的临床比较.docVIP

两种不同的检验方法检测乙型肝炎病毒标志物的临床比较 　　摘要：目的 对比时间分辨免疫荧光分析法（TRFIA）、化学发光免疫分析法（CLIA）检测乙型肝炎病毒标志物效用。方法 对272例对象进行有关于HBV血清标志物TRFIA、CLIA检测。结果 TRFIA检验HBcAb阳性率高于ECLIA，TRFIA检测HBsAb特异度、检测HBeAg与HBcAb灵敏度低于ECLIA方法，TRFIA检测HBeAg特异度、检测HBcAb特异度高于ECLIA，差异具有统计学意义（P0.05）。结论 TRFIA、CLIA检测各有优劣。 　　关键词：乙型肝炎；病毒标志物；化学发光免疫；时间分辨荧光免疫分析 　　乙型病毒性肝炎（以下简称乙肝），是一种严重威胁人类生命健康的病毒性传染病，保守估计全世界约20亿人感染过乙型肝炎病毒（HBV），现存慢性HBV感染者约3.5亿人。我国乙肝表面抗原携带率高达8%～10%[1]。乙肝危害极大，约50%～70%的慢性HBV感染者进展为慢性肝炎，其中多数又进展为肝硬化、肝癌，年死亡约100万例[2]。检测HBV病毒标志物是乙肝防治基础工作之一，可反映乙肝发展、转归以及预后。HBV标志物检测主要可分为定性分析与定量分析，定量分析主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、TRFIA、CLIA等，国内常用Elecsys Ⅱ系统、Architect系统，ELISA法应用最广[3]。CLIA、TRFIA灵敏度高，特异性好，可进行定量分析，但目前在临床上应用较少，关于两种方法优劣尚无明确定量。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 以2014年1月～2015年1月，医院开展HBV 血清标志物定量检测受检者作为研究对象。纳入标准：①知情同意；②严格质控。共纳入对象272例，其中男150例、女122例，年龄1～84岁、平均（41.3±5.2）岁。50例诊断为肝炎，已知FQ-HBV-DNA定量检测结果。其余均为日常检验样本。 　　1.2方法 采用CLIA双抗夹心法检测HbsAg、双抗原夹心法检测HbsAb、双抗体夹心法检测HbeAg、竞争法检测HbeAb、HbcAb。检查仪器，检测HBsAg四项血清标志物配套试剂，读取试剂盒上条形信息。先检测2份质控品，若检测值在要求范围内，开始检测待测样品，否则需排除失控原因再检测。 　　TRFIL双抗体夹心法检测HBsAg、双抗原夹心法检测HbsAb/双抗体夹心法检测HbeAg、竞争法检测HBeAb与HbcAb。采用铕标志，将稀释液按1：50配置成为事项HBV血清标注物标记物工作液，同时将相应的微孔反应板、空白板，按顺序放置在时间分娩荧光分析仪固定的反应板位置，将配套的校准液、质控品等放置于预设位置。复融血清标本，吸取500μl，采用EFFICUTA全自动样本处理系统加样，仪器缓慢振动孵育40min，洗板，加入铕标志物工作液，加增强液，仪器自动根据校准品浓度与荧光值，采用拟合方式计算标准曲线，而后求出待测样本浓度，进而判断结果。 　　以荧光PCR定量检测为金标准，抽提HBV-DNA模板，配置PCR反映液，并向每个PCR反应管中加入20μl，加入DNA模块液，进行PCR扩增。 　　1.3判断标准 CLIA法：HBsAg、HBeAg≥1.0 COI者为阳性，否则为阴性；HBeAb、HBcAb1.0COI为阳性，否则为阴性；HBsAb≥10mIU/ml者为阳性，否则为阴性。 　　TRFIL法：HBsAg≥0.2ng/ml者为阳性，否则为阴性；HBsAb≥10mIU/ml者为阳性，否则为阴性；HBeAg≥0.5PEIU/ml者为阳性，否则为阴性；HBeAb≥0.2PEI U/ml者为阳性，否则为阴性；HBcAb≥0.9PEI U/ml者为阳性，否则为阴性。 　　1.4统计学处理 WPS收集录入数据资料，以SPSS18.0软件包统计处理，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，若服从正态分布采用t检验，否则采用非参数检验，计数资料以数（n）或率（%）表示，比较采用χ2检验，以P0.75表示有较好的一致性。 　　2 结果 　　2.1两种方法检验结果分布 TRFIA检验HBcAb阳性率高于ECLIA，差异具有统计学意义（P0.05）（见表1）。两种方法一致性检验，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb一致性Kappa值分别为0.932、0.805、0.890、0.844、0.450，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb具有较好的一致性。 　　2.2检测HBV血清标志物效用 以PCR检测结果为金标准，HBsAb阳性147例、HBeAg阳性31、HBeAb阳性150例、HBcAb阳性195例。TRFIA检测HBsAb特异度、检测HBeAg与HBcA