2012年酵母蔗糖酶的提取-分离纯化和其蛋白质浓度与酶活力测定[12-6].pptVIP

实验十 酵母蔗糖酶的提取、分离纯化及其 蛋白质浓度和酶活力测定 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 蔗糖酶催化底物蔗糖分解成葡萄糖和果糖 蔗糖酶在酵母细胞中存在着两种形式 : 存在于细胞膜外细胞壁中的高度糖基化的外蔗糖酶，其活 力占蔗糖酶活力的大部分，是含有50％（质量分数）糖成 分的糖蛋白，该酶是蔗糖酶的主要形式 存在于细胞膜内侧细胞质中的低糖基化的内蔗糖酶。 本实验提取纯化的主要是外蔗糖酶 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 酵母细胞结构图 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 酶是生物体内具有催化活性的物质，可据酶蛋白的结构和性质来选择分离提纯方法和含量测定。 酶的分离提纯是为了提高纯度（或比活力）及收率；依据其性质（分子大小、溶解度、电荷、吸附等）进行分离; 同时用测定酶活力的方法了解酶的去向、衡量酶提纯的程度和得率。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 本实验由四个分实验组成： 蔗糖酶的提取与初步纯化 蔗糖酶各级分酶活力的测定 蔗糖酶各级分酶蛋白质浓度的测定 离子交换柱层析纯化蔗糖酶 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 分实验一：蔗糖酶的提取与初步纯化 一、实验目的 学习蔗糖酶分离提取的原理 学习掌握细胞破壁、有机溶剂沉淀蛋白质的原理与操作 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二、实验原理 细胞破碎的方法 高压匀浆破碎法（homogenization） 振荡珠击破碎法 (Skaking Bead) 高速搅拌珠研磨破碎法（fine grinding） 超声波破碎法（ultrasonication） 机械法 渗透压冲击破碎法（osmotic shock） 冻融破碎法（freezing and thawing） 酶溶破碎法（enzyme lysis） 化学破碎法（chemical treatment） 去垢剂破碎法（detergents） 非机械法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 蛋白质的沉淀 蛋白质从溶液中以固体状态析出的现象 　作用机制主要是破坏了蛋白质水化膜或蛋白质所带的电荷 主要沉淀方法： 　盐沉淀蛋白质——盐析 重金属盐沉淀蛋白质 某些酸类沉淀蛋白质 有机溶剂沉淀蛋白质 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂可破坏蛋白质的水化层，使蛋白质的溶解度下降；另一方面有机溶剂能降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子上不同电荷的引力，降低其溶解度，因此使之发生沉淀反应。如把溶液的pH 值调节到该蛋白质的等电点时，则沉淀更完善。 在室温条件下，有机溶剂沉淀所得蛋白质往往已发生变性。 若在低温条件下进行沉淀，则变性作用进行缓慢。 Evaluation