DNS法测定α—淀粉酶活力的方法.pptVIP

比酶活力计算 定义：1mg蛋白质的酶活力单位。 计算公式： 利用DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 目的要求 了解生物学研究中针对糖含量测定的常用方法及相关原理。 掌握一般标准曲线制作的意义及要求。 掌握DNS比色法测定α-淀粉酶活力的原理、方法及操作步骤。 掌握利用EXCEL分析工具库数据分析——回归分析，得到回归方程及相关分析结果。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 糖的测定方法 大致可分为三类： 1.物理法——旋光法、折光法、比重法； 2.物理化学法——点位法、极普法、光度法、色谱法； 3.化学方法——斐林氏法、高锰酸钾法、碘量法、铁氰化钾法、DNS比色法、蒽酮比色法、咔唑比色法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 生物学研究中关于糖测定中常用的方法 菲林试剂滴定——还原糖，常量分析 DNS比色法——还原糖，微量分析 蒽酮比色法——总糖，微量分析 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 配制系列浓度稀释液的方法 线性稀释——稀释液的浓度梯度是相同的（0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0……）； 对数稀释（倍数稀释）——系列溶液的浓度比是一常数，取决于稀释梯度——2倍稀释（1、1/2、1/4、1/8……）；10倍稀释（1、1/10、1/100、1/1000……）； 调和浓度稀释——系列溶液的浓度为连续排列整数的倒数（1，1/2，1/3，1/4，1/5……）。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. α-淀粉酶酶活力测定的原理 底物（反应物）为淀粉——碘比色法（反应一定量淀粉为糊精的时间） 产物为麦芽糖、糊精等——麦芽糖为还原糖，可以用测定还原糖的方法来测定其生成量（如DNS法），从而计算出酶活力单位。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. DNS试剂测定还原糖的原理 淀粉酶催化产生的还原糖（麦芽糖等）能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，其反应如下： 淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位样品（重量或体积）在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 酶活力测定（DNS比色法） 酶活力定义：在一定反应条件下（本实验为40 ℃ ，pH5.6或6.0），1分钟反应生成1mg麦芽糖的酶量定义为1个酶活力单位。 注意：去除β-淀粉酶的干扰（ β-淀粉酶不热耐，在70℃15min钝化 ）——植物材料来源需要注意。本此实验中忽略不计。 检测的原理： 酶解的产物之一——麦芽糖具有还原性，可以使试剂中的3，5-二硝基水杨酸还原，形成红色的物质，在540nm下有吸收峰，并和浓度呈一定线性关系。 计算公式：根据标准曲线计算。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3，5-二硝基水杨酸（DNS）试