实验3蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin-酚法讲述.ppt

实验三 蔗糖酶蛋白含量的测定 ——Folin-酚法 * * 一、实验目的和要求 1、学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法； 2、掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量； 3、掌握分光光度计的使用方法。 二、实验基本原理 Folin-酚测定法是在双缩脲反应的基础上发展起来的，Folin-酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的。甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比。可用500nm波长比色测定，适于测定蛋白质含量0.05～0.5g/L.优点： 简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定。缺点： 该反应受多种因素的干扰。 1. 蛋白质(肽键) OHˉ 甲试剂 (酒石酸钾钠铜盐)