BADH2基因创制香米新种质.pdf

利用基因组编辑定点敲除 水稻BADH2基因创制香米新种质 完?成?人：?高彩霞、单奇伟、陈坤玲等 完成单位：? 中国科学院遗传与发育生物学研究所 项目简介 香米是一种具有特殊芳香气味的优质稻种，培育高产优 质的香米品种具有重要意义。香米中富含一种芳香化合物， 2- 乙酰基 -1- 吡咯啉（2AP）。研究表明 BADH2 是控制米 香的决定基因，香稻中 BADH2 基因的自然变异导致 2AP 合 成的前体化合物 γ- 氨基丁酸醛（GABald）大量积累，进 而转化成 2AP（如图 1a）。因此通过 TALEN 基因组编辑定 向敲除普通水稻 BADH2 基因，改变其代谢途径，可以促使 2AP 在稻米中大量合成，从而开发一种新的香米育种方法。 我们设计了 TALEN 核酸酶，它可以准确识别并切断 BADH2 基因特定序列，利用细胞非同源末端连接（NHEJ） 修复机制产生基因功能缺失突变。利用农杆菌介导的水稻 转化方法，从 T0 代中筛选出 6 个杂合的 badh2 水稻突变 图1? TALEN技术敲除水稻BADH2基因创制香米新种质 体。DNA 测序发现在 TALEN 靶位点处含有 1 至 12bp 不 等的核苷酸删除突变（图 1b）。质谱色谱联用仪（GC-MS）测定的稻米 2AP 含量表明：纯合 badh2 突变株系稻米中均检测到较高的 2AP，与阳性对照香米稻花香 2AP 浓度相当或略高；而在阴性对照日 本晴中未检测到 2AP（图 1c）。这些突变体株系除了在 BADH2 基因位点删除了 1bp 外，与转基因受 体材料日本晴完全相同。此外，我们在优良水稻品系 LPK 中也获得较高的突变效率，进一步证明这对 TALEN 在不同水稻品种中的广适性。 项目的意义在于证明 TALEN 技术在农作物品种定向改良中的重要作用。 通过设计具有位点特异性的 TALEN 核酸酶，敲除作物中负调控产量、品质、 抗逆性等重要基因，从而获得农艺性状极大改良的突变株，再分离筛选出不 含转基因载体的后代。基因组编辑育种技术即克服了传统杂交育种周期长， 工作量大，与不良性状连锁遗传等弊端；也削弱了转基因技术引发的生物安 全性或转基因沉默等问题，代表未来农作物分子设计育种的新趋势。 获得专利 水稻基因 BADH2 的定点敲除系统及应用：ZL201210548714.7 3