第二十一章DNA重组及重组DNA技术第一节自然界DNA重组—同源重组.pdf

第二十一章 DNA重组及重组DNA技术 第一节 自然界DNA重组 —同源重组 （同源序列之间的交换） —位点特异性重组 （诱导插入、倒转或删除 ） —转座重组 （可移动DNA元件 ） 第二十一章 DNA重组及重组DNA技术 第二节 重组DNA技术 一、重组DNA技术中常用的工具酶 —— DNA （?）限制性核酸内切酶 ?于切割 DNA —— DNA （?） 连接酶 ?于催化 ?段连接 —— （三）碱性磷酸酶 去除核酸分?末端的磷酸基团 —— RNA cDNA （四）反转录酶 以 为模板合成 —— DNA （五）末端脱氧核苷酰转移酶 给 末端加尾以构成黏端 DNA I—— DNA （六） 聚合酶 合成 DNA I —— DNA I （七） 聚合酶??段 保留了 聚合酶的部分酶活性 Taq DNA —— PCR （?） 聚合酶 ?于 —— 5′ （九）多核苷酸激酶 使寡核苷酸链 羟基末端磷酸化 第二十一章 DNA重组及重组DNA技术 第二节 重组DNA技术 二、重组DNA技术中常用的载体 载体：可携带外源DNA?段（?的基因），转移?受 体细胞的?种能?我复制的DNA分?。 载体分类： 克隆载体 1.按功能 表达载体 质粒载体 噬菌体载体 2.按来源 黏粒载体 病毒载体 ??染?体载体等 二、重组DNA技术中常用的载体 （?）克隆载体?于外源DNA的克 隆 1、克隆载体应具备的主要特点 1 ori （）?少有?个复制起点（ ） 2 （）?少有?个选择性标志 3 （）有单?酶切位点 多克隆位点（MCS） （?）克隆载体?于外源DNA的克 隆 2 、常?克隆载体 1 (plasmid) （）质粒 ：最常?的克隆载体 l??泛存在于细菌、酵?等多种微?物中 l?独?于宿主细胞染?体外，环状双链DNA(1～200 kb) l?能在宿主细胞内独??主复制 l?质粒的不相容性 在同?个细胞中，同类质粒不能 并存的现象。 （?）克隆载体?于外源DNA的