贝类性腺内两种甾类激素的负化学源GCMS分析研究.pdfVIP

第24卷增刊 分析测试学报 V01．24 !!坚!!!!型!!!!!!些!竺!型!!!：!竺!!!!!墅坐型 1些兰!皇：一 !!!：型! 贝类性腺内两种甾类激素的 负化学源GC—MS分析研究 徐继林，严小军，叶芳挺 (宁渡大学浙江省海洋生物工程重点实验室，浙、兀宁渡315211) 生物激素对生物体的生长发育和繁殖有着重要的生物学意义。特别是甾醇类激素如1邛．雌二醇 的合成代谢和分泌对生物体起生殖调控作用。为了解它们在生物体内的合成代谢途径以及从环境中 富集的程度大小，需要对它们在生物体内含量进行准确灵敏的测定。由于它们在生物体内含量很小， 而研究过程中生物样品数量也很少，所以如果能够将它们通过一定的方法一次性测定出来将有很重 要的现实意义。负离子化学(Negative 具有强电子亲和力的化合物有着较高的灵敏度，以前由于气质联用仪NCI源的单一性，普及性较 差；现在，同一台质谱仪内不同源可以极为方便的互换，使得NCI源的气质联用分析更广泛地得到 应用。本研究建立了NCI源气相色谱一质谐联用检测海洋生物体内两种激素的连续分析方法，以期 为研究激素在贝类生物体内的调控作用提供方便灵敏的检测手段。 1 实验部分 1．1材料与方法 1．1．1 mm×0．25 公司的30in×0．25 Ixm 98％)，美国Alltech公司的七氟丁酸酐(heptafluorobutyricanhydride，HFBA)。 进样口温度250℃，载气为99．999％的高纯氦，总流速20mL／min，柱流速1．50mL／min，柱前 压112．4 oC后以2。C／min升至 kPa，柱起始温度100℃，保持3．5min，以20℃／rain升至120 150℃，再以25℃／min升至280oC保持10min。不分流进样1txL。采用NCI源分析，反应气为甲 烷，离子源温度200℃，接口温度250℃，选取全程离子碎片扫描(SCAN)模式时，质量扫描范围 000 为150—1 u。选取特征离子碎片扫描(SIM)模式时，EST选择m／z644、428和197作为特征碎 定量时的目标离子，后两个离子作为定性时的参考离子。 maindroni) 1．1．2样品处理取2005年2月购自宁波市场的鲜活野生一龄曼氏无针乌贼(Sepiella 和一龄野生褶牡蛎(Ostrea plicatula)，解剖后取性腺，用高速分散匀质机匀浆后冷冻干燥。用氯 仿一甲醇一水(体积比1：2：0．8)提取，加氯仿一水(体积比1：1)分相后，取氯仿层蒸干，正己 烷一乙醚(体积比1：1)溶解，过硅胶柱，正己烷去脂，二氯甲烷一乙酸乙酯(体积比1：1)洗脱， 蒸干，加人50 HFBA衍生剂．130℃油浴20min，氮气吹到近干，用乙酸乙酯一醋酸酐(体积比 IxL 1：1)定容到1．0rIlL，供Gc—Ms分析用。根据样品中所含各激素的特征离子信号响应强度，用外 标法求出各激素的含量。 2结果与讨论 该方法在2．5～200neemL范围内线性关系良好，EST和PG的线性方程分别为Y=1606X和 Y=85X，方法的检出限分别为0．13ng／mL和0．01ng／mL，当向0．1g空白样品中添加50ng的激素 时，平均回收率分别为52．5％和63．1％，相对标准偏差分别为9．1％和11．2％。用此方法对市场上 销售的野生一龄曼氏无针乌贼(Sepiellamaindroni)和一龄野生褶牡蛎(Ostreaplicatula)腺体进行测 基金项目：国家新药基金(2003AA223511)；浙江省青年人才基金资助(RC0：2059 第24卷 分析测试学报 增fⅥ 定