实验九 玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌.ppt

实验九 玻璃器皿的清洗包扎，培养基的配制及灭菌 　一、目的要求 1、明确培养基的配制原理。 2、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围 4、了解干热灭菌的原理和应用范围。 5、了解紫外线灭菌的原理和方法。 6、玻璃器皿的清洗包扎要熟练操作。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下： 　牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 　NaCl 5g 琼脂15～20g 水 1000ml pH 7．4～7．6 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为200—300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。 为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3—5％的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。 超净工作台内紫外灯（线）灭菌 三、器材 牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂； 1mol/L NaOH， 1mol/L HCl； 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5．5～9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。 培养皿，试管，吸管，电烘箱等。 牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿（6套一包），手提式高压蒸汽菌锅等。 紫外线灯，3～5％石炭酸或2～3％来苏尔溶液，牛肉膏蛋白胨平板 。 四、操作步骤 一、称量 准确、迅速，一种药品一把药勺，勿盖错药瓶盖 二、溶化 水的加法、加热搅拌 三、调pH 忌调过头后来回调 培养基的制备 四、过滤 五、分装 1、液体分装：试管高度的1/4左右 三角瓶容积的1/2 2、固体分装：试管高度的1/5左右（制斜面） 半固体：1/3左右（垂直穿刺） 马丁氏培养基——定容；瓶口棉塞 培养基的制备 六、加塞 七、包扎 八、灭菌 一般15磅（121℃）20分钟 九、摆斜面 温度、斜面长度（试管的1/2） 十、无菌检查 37℃培养24—48小时 常用培养基 一、牛肉膏蛋白胨培养基 应用最广泛的细菌基础培养基。 配方： 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 水 1000ml pH 7.4-7.6 常用培养基 二、高氏Ⅰ号培养基 用于培养、观察放线菌形态特征； 加入适量的抗菌物质（抗生素、酚）用于分离放线菌（选择性培养基）。 常用培养基 高氏Ⅰ号培养基配方： 可溶性淀粉 20g 按配方顺序依次溶解否则 NaCl 0.5g 产生沉淀 KNO3 1.0g K2HPO4.3H2O 0.5g 抗生素现用现加,温度不宜 MgSO4.7H2O 0.5g 过高否则易分解 FeSO4.7H2O 0.01g 琼脂 15-25g 水 1000ml pH 7.4-7.6 常用培养基 三、马丁氏培养基 用于分离真菌的选择性培养基 配方： KH2PO4 1.0g 另加孟加拉红和链霉素 MgSO4.7H2O 0.5g 抑制细菌、放线菌生长 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 琼脂 10-20g 水 1000ml pH 自然 试管分装 摆斜面 摆斜面实物图 五、实验报告 结果