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实验六 根系活力的测定（TTC法） 根系活力的测定 一、测定意义 根的生长情况和活力 水平直接影响植物个体的 生长情况、营养状况和产 量水平。 四、仪器设备 五、试剂配制 1. 乙酸乙酯（分析纯）。 2. 次硫酸钠（Na 2 S 2 O 4 ），分析纯，粉末。 3. 0.4％TTC溶液：准确称取TTC 4.0g，溶于少量水中。定容到1000ml。 4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。 5. 1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。 六、测定材料 玉米根尖(完全苗、缺素苗) 七、操作步骤 1. TTC标准曲线的制作:略 取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许 Na 2 S 2 O 4 粉摇匀后立即产生红色的三苯甲腙。再用乙酸 乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25ml、 0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中， 用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲腙25μg、50μg 、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白 作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 2.把根洗净，吸干水分，剪取根尖1cm。完全苗根尖0.2克两份，缺素苗根尖0.2克两份。移入青霉素瓶中 九、注意事项 1、要剪取根尖作为测定材料； 2、测定的同时要做空白对照； 3、TTC容易氧化，要现用现配，避光保存； 4、反应结束后，根系要吸干水分才能研磨， 否则溶液容易混浊； 5、要用少量多次的乙酸乙酯把残渣中的红色 三苯甲腙提取干净。 十、思考题 1、为什么要测定根系活力？植物 的根与地上部分有何关系？ 2、测定根系活力时最好选择根的 哪个部位？为什么？ 3、比较完全液培养的玉米苗与缺 素玉米苗根系活力的差异，并解释原因。 * 福建农林大学生命科学院 植物生理生化实验室 （TTC法） 一、测定意义 二、实验目的 三、测定原理 四、仪器设备 五、试剂配制 六、测定材料 七、操作步骤 八、结果计算 九、思考题 十、注意事项 合成氨基酸和植 物激素（ABA、 CTK、GA等） H 2 O 无机盐 理解植物根系活力的内涵 掌握根系活力测定的原理与方法 比较玉米完全液和缺素苗根系活力的差异 二、实验目的 a-萘胺氧化法 甲烯蓝法 TTC法 三、测定原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV 的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即 生成红色而不溶于水的三苯基甲腙 （TTF）。 生成的TTF比较稳定，不被空气中的氧自动氧化。 TTC TTF （无色，溶于水） （红色，不溶于水） 根系活力 脱氢酶 琥珀酸 延胡索酸 苹果酸 丙二酸 碘乙酸 促进 抑制 1h 1h 1h 1h 37 ℃（黑暗）保温 1ml 5ml 0.2 缺素苗处理 5ml 1ml 0.2 缺素苗CK 1ml 5ml 0.2 完全苗处理 5ml 1ml 0.2 完全苗CK 1mol/L 硫酸 0.4%TTC pH7 PBS 混合液 1mol/L 硫酸 根系鲜重 （g） 样品 根尖处理 用镊子取出根，吸干水分，与2～3ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎，红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml。 以空白试验作参比 测485nm下吸光度 消光值查标准曲线，求四 氮唑还原量（OD/0.952) 八、结果计算 四氮唑还原强度（ug?g －1 根鲜重? h －1 ） 四氮唑还原量（ug） 根重（g）×时间（h ) ＝ *