第2章 发酵液的预处理和菌体回收.ppt

第2章 发酵液的预处理和菌体的回收 生化分离工程的工艺流程： 二.发酵液的预处理技术： （二）发酵液的预处理技术方法： （重点） 1.加热 最简单、最经济的预处理方法是加热，加热不仅可以增加料液的操作特性，也可以使杂蛋白变性聚集。 但加热变性的方法只适合于对热稳定性的产物。 4.凝聚和絮凝技术 (2)扩散双电层的结构模型图 A.电解质可离解成正、负离子，中和电荷，静电斥力作用减弱，双电层破坏 B.电解质溶于水，多走表面水即破坏水化膜 （4）常用的凝聚剂 简单的酸或碱 Al2(SO4)3.18H2O，AlCl3.6H2O， 三氯化铁 ZnSO4，MgCl2 PS：阳离子对负电荷的胶粒凝聚能力次序为： Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+ （1）原理 絮凝剂为长连高分子化合物，含有多个活性功能基团（如NH2－，COOH－）等，他们通过静电引力、范德华力或H键等其它化学键，强烈地吸附在胶体粒子表面，从而使胶体粒子连接成网状结构。（－－架桥作用） （2）常用絮凝剂的种类： （3）絮凝作用的影响因素： 凝聚、絮凝与盐析的区别和联系 联系： 絮凝、凝聚和盐析都是使蛋白质等胶体从溶液中析出的方法，但其原理和方法有所不同。 区别：絮凝是指通过聚电解质的架桥作用，将溶液中的蛋白质连接起来，增大蛋白质的尺度而不是蛋白沉淀。 凝聚和盐析虽然都是采用无机盐使蛋白质沉淀，但凝聚所用的是含有高价离子的无机盐，主要是由于蛋白质与带相反电荷的高价离子发生电荷中和作用而使得蛋白质聚集沉淀，所以凝聚所需的盐浓度很低。而盐析使用的是中性盐，主要依靠盐离子的亲水性，夺走与蛋白质亲和的水而沉淀，因而盐析通常需要较高的盐浓度。 5.加助滤剂 （1）定义： 助滤剂是一种质地坚硬、颗粒均匀，不可压缩的，具有吸附胶体能力的惰性物质。 （2）原理： 助滤剂具有吸附胶体能力，可以改变滤饼的结构（使其成网状），降低滤饼的可压缩性（可压缩变成部分可压缩），从而降低过滤的阻力，加快过滤速度。 （4）选择依据 a.根据目的物的性质－品种选择 b.根据过滤介质和过滤情况－品种选择 c.根据过滤速度及滤液澄清度－粒度选择 d.用量选择 （三） 除杂 1.杂蛋白的去除 （1）等电点沉淀 蛋白质在某一pH下，净电荷为零，溶解度最小，称为等电点。因为羧基的电离度比氨基大，故蛋白质的酸性性质通常强于碱性，因而很多蛋白质的等电点都在酸性范围内（pH 4.0－5.5）。 ①加热：在链霉素生产中，在pH3.0时，加热至70～75℃，维持30min，黏度降为1/6，过滤速度提高10-100倍。 ②加有机溶剂、表面活性剂、酸碱、重金属等。 如：在酸性溶液中，蛋白质能与一些阴离子如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀； 如：在碱性溶液中，能与一些阳离子，如Ag＋，Cu2＋，Zn2＋，Fe2＋和Pb2＋等形成沉淀。 变性蛋白质溶解度较小。最常用的使蛋白质变性的方法是加热。加热还能使液体粘度降低，加快过滤速度。该法只适用于对热较稳定的生化物质。 （3）吸附 在发酵液中加入一些反应剂，相互反应后生成的沉淀物可吸附蛋白质而使其沉淀。 如在四环素发酵液中加入黄血盐和硫酸锌，两者反应生成K2Zn3[Fe(CN)6]2 在枯草杆菌的碱性蛋白酶发酵液中加入氯化钙和磷酸盐等 （4）盐析 2 不溶性多糖的去除 当发酵液中含有较多不溶性多糖时，黏度增大，固液分离困难，可用酶将其转化为单糖。 三.悬浮液的分离方法和分类： （二）过滤 2.影响过滤的因素 （1）悬浮液的性质及大小 （2）粘度 （3）操作条件：T、pH、P、滤饼厚度等 （4）助滤剂 （5）设备及技术 3.改善过滤的方法 （1）降低粘度 （2）增大悬浮颗粒体积 （3）加助滤剂 （4）操作条件的改变 4.固液分离设备： 真空过滤的基本过程 料液（抽真空）→ 液体通过滤布经过转鼓，最后由中间管路和分配阀排出。 而固体附在滤布表面形成滤饼→转出液面→洗涤→脱水→卸料→最后从转鼓上脱落下来 作业： 板框压缩机 鼓式真空过滤机 错流过滤系统 离心分离机 （1）板框压滤机 （2）真空过滤器 back ? Dry Wash Immersion Knife Cake Feed Rotary vacuum filter 转鼓真空过滤机 * * 一、悬浮液的基本性质 1.水的极性 2.水的粘度 3.水的表面张力 （一）预处理的目的 改变料液性质,促进固液分离，提高分离效率 除去部分杂质(杂蛋白和不溶性的多糖等），以利后续操作 尽可能使产物转移到后处理的相中，利于提取和精制的顺利进行。 ①物理性质的改善 ②杂质的去除 预处理的方法 加热（降低黏度、去除杂蛋白） 凝聚与絮凝（增大粒度） pH