第3章 培养基成分及配制.ppt

在植物组织培养工作中，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。 * * 二、母液的配制 * * 称 量 母液分装 确定培养基 溶 解 定 容 贴标签 保存于冰箱 (一)母液配制流程图 * * 一般母液配成比所需浓度高10-100倍。 母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。 母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。 (二)母液配制要求(以MS为例) ： 具体要求： (1)大量元素母液 可配成浓度20倍母液。 (2)微量元素母液 可配成浓度1000倍的母液。 (3)铁盐母液 可配成100倍的母液， (4)有机物母液 可配成100倍的母液。 (5)激素母液的配制 每种激素必须单独配成母液，浓度一般配成1mg／ml。用时根据需要取用。因为激素用量较少，一次可配成50ml或100ml。 * * IAA、IBA、GA溶于少量的95％的酒精 加水定容； NAA 热水或少量95％的酒精 加水定容； 2,4-D可用少量1mol NaOH溶解 加水定容； Kt和BA 少量1mol的HCI中 加水定容； 玉米素 于少量95％的酒精 加热水到一定浓度。 配制好的母液瓶上应分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数、日期及配1L培养基时应取的量。 * * 激素溶解方法： Ms母液（储备液）的配制与保存 成 分 用 量(g/l) 每升培养基取用量(ml) 母液1（大量元素 20×） NH4NO3 KNO3 MgSO4.7H2O CaCL2.2H2O KH2PO4 母液2（微量元素 1000×） KI H3BO3 MnSO4.4H20 ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCL2.6H2O 33 38 7.4 8.8 3.4 0.82 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 0.025 　　　50 　　　 １ 成 分 用量（ｇ／ｌ） 每升培养基用量（ｍｌ） 母液3（铁盐 100×） FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O 2.78 3.73 10 母液4（维生素、氨基酸100×） 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 盐酸硫胺素 甘氨酸 5 0.025 0.025 0.005 0.1 10 三、培养基的制备 * * 移母液 调PH值 培养基熬制 灭　菌 称取蔗糖、琼脂 扎　口 定　容 分　装 二次定容 接　种 确定配方 母液移取：一次性移取，不能吸进吸气球里，数量看准，不滴不漏，吹净为度。 * * 大量元素母液 取50ml 微量元素母液 取1ml 铁 盐母液 取 10ml 有机物母液 取10ml 培养基的配制 1、在洁净的不锈钢锅里放入750ml蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖，加热熔化。 2、加入储备液1，2０ｍｌ，储备液2、３、４各1，10，10ｍｌ，按需要量加入植物激素。 3、用蒸馏水定容到1L。 4、调pH值。pH一般5.8 5、培养基的分装。 6、包扎。 7、培养基的高压灭菌。 取蒸馏水定容到750ml 取蔗糖25－30g， 琼脂7－8g。 * * 1.称取蔗糖、琼脂 2.培养基熬制： * * (1).将加入称好的蔗糖和琼脂培养液倒入铝锅中，边煮边搅拌，防止糊底。用旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全部融化。 (2).加入各种储备液，定容至1L, 摇晃使均匀。 3.调pH值： * * 用0.1MNaOH或HCl调pH值 为5.8 趁热分装，100ml的三角瓶约装入30－40ml，25瓶/L， 加盖封口。 培养基的灭菌 培养基应及时（24h以内）灭菌，防止变质。 高温高压蒸汽灭菌：121℃，1.1Kg/c㎡，15-20min，时间过长，培养基成分易变性失效 过滤灭菌：在高温高压下易分解的培养基和激素类 * * 培养基高压蒸汽灭菌所必需的最少时间 容器的体积/mL 在121℃灭菌所需最少时间/min 20-50 15 75-150 20 500 25 1000 30 1. 常见的培养基种类有哪些？各有何特点？专为什么材料的培养而设计的？2.培养基的成分主要包括有哪些？3.培养基中常用的植物激素有哪些？各有