北科大微生物3、培养基的配制及灭菌题稿.ppt

* * 实 验 三 培养基的配制和灭菌 目的要求 了解培养基的配制原理、常规配制程序和配制过程各环节的要求和注意事项。 掌握肉膏蛋白胨培养基、高氏合成一号培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和马丁培养基的配制方法。 从自然界中分离特定功能的微生物，了解特定微生物的筛选培养基的设计原理及配制方法。 掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法。 熟悉有关的准备工作及操作方法。 培养微生物前的有关准备工作：器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等 肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的培养基，属于天然培养基（complex media, undefined media）。其主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。它们分别提供微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、生长因子和无机盐等。 配天然培养基时可以用自来水，但自来水中常含Ca2＋，Mg2＋离子，可与其他成分形成沉淀。 肉膏蛋白胨培养基 高氏合成一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基(defined media) 。培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源，KNO3作为氮源，K2HPO4、MgSO4和FeSO4作为无机盐（高价阳离子盐需单独灭菌后临用前与含磷酸盐的培养基混匀）。 合成培养基必须用蒸馏水 高氏合成一号培养基 豆芽汁葡萄糖培养基是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基，为半合成培养基(semi-defined media) 。培养基配方出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。 豆芽汁葡萄糖培养基 马丁培养基是选择培养基，属于半合成培养基，常用于从自然环境中分离真菌，其中的孟加拉红能抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响， 另外，在使用前，向培养基中加入去氧胆酸钠和链霉素(30u/ml)。去氧胆酸钠为表面活性剂，防止霉菌菌丝蔓延，还可抑制G+ 细菌生长；链霉素对多数G－ 细菌具抑制生长作用。从而达到分离真菌的目的。 马丁培养基 产葡萄糖氧化酶菌株的筛选培养基 葡萄糖氧化酶 （Glucose Oxidase，E.C.1.1.3.4，简称GOD ） O2 + C6H12O6 + H2O C6H12O7 + H2O2 GOD 葡萄糖氧化酶 葡萄糖氧化酶在生化检测（葡萄糖）、面粉处理（过氧化氢对半胱氨酸的作用形成二硫键）、食品保鲜（去除氧气）等领域具有广泛应用。 培养基——葡萄糖氧化酶 平板筛选培养基(g·L-1)： 葡萄糖80，蛋白胨3，(NH4)2HPO4 0.39，KH2PO4 0.19， MgSO4·7H2O 0.16，CaCO3 3.5，可溶性淀粉10，KI 1.7，脱氧胆酸钠0.2，琼脂20，硫酸链霉素25000U。 葡萄糖氧化酶 产葡萄糖氧化酶的微生物大多为霉菌。加入脱氧胆酸钠是为了抑制菌丝的形成以获得不互相粘连的霉菌菌落。加入硫酸链霉素是为了抑制细菌的生长。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖会生成葡萄糖酸，pH下降，可以通过CaCO3控制培养基的pH，并形成透明圈。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖会生成过氧化氢，可以氧化KI生成I，使淀粉变色，从菌落周围是否出现特异的淀粉蓝色圈可以判断出该菌是否产酶。 培养方法——葡萄糖氧化酶 土壤霉菌分离：取土壤样品5g，加入95mL的无菌水中，200r·min-1摇床振荡 1h。 平板筛选培养：采用Fiedure.K.J显色法。将富集培养后的土壤悬液，按不同稀释度（10-2、10-3、10-4）接种于平板筛选培养基，28℃培养3d。 斜面培养：挑取平板培养基中蓝色圈较大的菌株接种至斜面培养基，28℃恒温，培养4d后置于4℃冰箱保存备用。 摇床培养：接种斜面保存的菌种于发酵培养基，250mL摇瓶50mL装液量，28℃恒温， 200r·min-1旋转摇床，培养2d。 葡萄糖氧化酶 实验材料 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、马铃薯、蔗糖、KNO3、K2HPO4、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O、可溶性淀粉、葡萄糖， (NH4)2HPO4、KH2PO4、 CaCO3 、KI、脱氧胆酸钠、硫酸链霉素、(NH4)2SO4、K2HPO4、KCl、琼脂等各种培养基的组成成分、0.1％孟加拉红溶液，l mol/L HCl、l mol/L NaOH。 高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱、紫外线杀菌灯 、电炉、天平 其它：酒精灯、试管、称量纸、牛角匙、烧杯、量筒、玻棒、pH试纸、玻璃珠、三角瓶、封口膜、无棉塞的空试管、培养皿、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、记号笔、标签等。 准备无菌水，去离子水装于250ml三角瓶中，每瓶95ml，放置3-5颗玻璃珠，121℃灭菌30min。 实验内容 （玻璃器皿的洗涤和包装） 1．玻璃器皿的洗涤 2．灭菌前玻璃器皿的包装 (1)培养皿的