DNA损伤与修复教学.pptVIP

DNA既稳定， 但也脆弱 哪些因素能影响到DNA的完整性？ 细胞内源的因素 环境因素 -例如化学试剂、污染物和UV线 疾病治疗 -例如离子辐射和化疗 细胞内源因素 复制错误 例如四种dNTP之间的不平衡导致错配 DNA本身的不稳定 碱基的自发脱氨基 DNA的脱嘌呤/脱嘧啶导致碱基脱落 活性氧的作用 DNA, 蛋白质和脂质的氧化 脱嘌呤/脱嘧啶 脱嘌呤比脱嘧啶更容易 在DNA分子上产生无碱基位点（AP位点） 大肠杆菌 1 次脱嘌呤/ 基因组/ 复制 嗜热水生菌 300次脱嘌呤/ 基因组/ 复制 哺乳动物细胞 10 000次脱嘌呤/ 基因组/ 复制 活性氧（ROS） 由正常的细胞代谢产生 线粒体利用细胞 ~85% O2，是主要的ROS来源 导致DNA、蛋白质和脂质损伤 常见的形式： 过氧化氢 (H2O2) 超氧化物自由基 (O2?-) 一氧化氮 (?NO) 羟基自由基 (HO?) 过氧亚硝基阴离子 (O=NOO-) 烷过氧化物 (ROOH) 烷氧自由基 (RO?) 环境（外源）因素 化学试剂 (1) 天然化合物 黄曲霉素 (2) 人造化合物 苯并芘- 香烟 顺铂- 化疗药物 物理因素 (1)UV (2)离子辐射 γ-射线 x-射线 DNA损伤类型 碱基修饰 碱基丢失-无碱基位点 复制错误：错误 链断裂 蛋白质-DNA交联 DNA-DNA交联 稳定，但脆弱 不修复将导致突变 干扰转录和复制 导致突变 加速衰老 细胞的修复机制是必需的 修复机制是全方位的、高效的 1 /1000损伤躲过修复 DNA 修复 DNA与其它生物大分子一样，在受到机体内外因素的作用下，其结构会遭受到各种各样的损伤，但是，和其它生物大分子不一样的是，DNA是唯一的一种在发生损伤以后可以被完全修复的分子，而其它生物大分子在受到损伤以后要么被降解，要么被取代。当然，并不是发生在DNA分子上的所有损伤都可以修复。如果DNA受到的损伤不能及时被修复，不仅会使DNA的复制和转录受到影响，还可以导致细胞的癌变和早衰。 细胞之所以在DNA受到损伤以后，选择的处理方法是尽量将其修复而不是将其降解，这一是因为作为遗传物质的DNA分子在细胞内只有一个拷贝，如果将其水解的话，细胞也就失去了存在的根基；二是DNA的互补双螺旋结构使得修复一个受损伤的DNA分子变得很容易。正因为如此，一种生物体，即使是那些基因组甚小的生物，也会在修复上投入大量的基因（≥100个基因），这再次说明了DNA的稳定性压倒一切。. 直接修复 嘧啶二聚体的直接修复——由DNA光裂解酶催化。此酶直接识别和结合嘧啶二聚体。然后，利用作为吸光色素的辅基捕捉到的光能，将嘧啶二聚体打开，最后再与DNA解离。但是胎盘类哺乳动物却没有这种酶。 烷基化碱基的直接修复——由特定的烷基转移酶催化 DNA链断裂的直接修复——由DNA连接酶催化。 切除修复 切除修复先切除损伤的碱基或核苷酸，然后，重新合成正常的核苷酸，最后，再经连接酶重新连接，将原来的切口缝合。整个切除修复过程包括识别、切除、重新合成和重新连接。 切除修复又分为碱基切除修复（BER）和核苷酸切除修复（NER），两者的主要差别在于识别损伤的机制上，前者是直接识别具体的受损伤的碱基，而后者并不识别具体的损伤，而是识别损伤对DNA双螺旋结构造成的扭曲。 碱基切除修复 DNA 糖苷酶切除受损伤的碱基 短修补——是主要途径，约占80%~90%，只需合成属于AP位点的1个正常的核苷酸 长修补——是次要途径，约占10%~20%，为短修补途径的备用途径，要合成1小段寡聚核苷酸 NER在所有的生物具有相同的步骤： 识别损伤—由特殊的蛋白质完成，并由此引发一系列的蛋白质与受损伤DNA的有序结合； 切除损伤—特殊的内切酶在损伤部位的两侧切开DNA链，随后两个切口之间带有损伤的DNA片段被去除； 修复合成—DNA聚合酶以另外一条链为模板，合成已被切除的序列； 缝合切口—由DNA连接酶催化。 两类碱基切除修复-全局性基因组NER和转录偶联性NER 全局性基因组NER负责修复整个基因组的损伤，速度慢，效率低。 转录偶联性NER专门负责修复那些正在转录的基因在模板链上的损伤，速度快，效率高。 两类NER的主要差别在于识别损伤的机制上，至于损伤识别以后发生的修复反应并无本质上的不同。TCR由RNA聚合酶识别损伤，当RNA聚合酶转录到受损伤部位而前进受阻的时候，TCR系统即被起动。 大肠杆菌的核苷酸切除修复 受到ATP水解的驱动，2个UvrA与1个UvrB形成三聚体复合物 （UvrA2UvrB1）； 该复合物与DNA随机结合后，沿着DNA