1106控制菌检查教案.ppt

1106 ：控制菌检查法 * 1106 ：控制菌检查法 肠道菌增菌液体培养基明胶胰酶水解物 10.0g ；二水合磷酸氢二钠 8.0g 牛胆盐 20.0g ；亮绿 15mg ；葡萄糖 5.0g 纯化水 1000mL 磷酸二氢钾 2.0g 除葡萄糖、亮绿外,取上述成分,混合,微温溶解，调节 pH 值使加热后在 25℃ 的 pH 值为 7.2±0.2，加入葡萄糖、亮绿，加热至 100℃ 30 分钟，立即冷却。 1106 ：控制菌检查法 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 酵母浸出粉 3.0g 中性红 30mg 明胶胰酶水解物 7.0g 结晶紫 2mg 脱氧胆酸钠 1.5g 琼脂 15.0g 葡萄糖 10.0g 纯化水 1000mL 氯化钠 5.0g 除葡萄糖、中性红、结晶紫、琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解，调节 pH 使加热后在 25℃的 pH 值为 7.4±0.2。 加入葡萄糖、中性红、结晶紫、琼脂，加 热煮沸（不能在高压灭菌器中加热）。 1106 ：控制菌检查法 耐胆盐革兰阴性菌 注意事项： ①接种量0.1g、0.01g 和 0.001g（或 0.1mL、0.01mL 和 0.001mL）,结果直接查表②若接种量减少 10 倍（如 0.01g 或 0.01ml，0.001g 或 0.001ml，0.0001g 或 0.0001ml），则每 1g(或 1mL)供试品中可能的菌数（N）应相应增加 10 倍。③含药材原粉的中药制剂：固体口服液体口服给药制剂及中药饮片 1106 ：控制菌检查法 铜绿假单胞菌 定义：属于假单胞菌属、革兰氏阴性杆菌、氧化酶阳性、产生绿脓毒素。此外还可液化明胶、还原硝酸盐为亚硝酸盐、在42±1℃能生长。 对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症 常见的分离鉴别试验 1106 ：控制菌检查法 铜绿假单胞菌 ①增菌培养：1:10样品10ml加90ml胰酪大豆胨液体培养基， 36±1℃培养 18- 24小时 ②分离培养：从培养液挑取培养物，化线接种与十六烷基三甲基溴化铵琼脂培养基（选择性）， 36±1℃培养 18- 24小时，菌落周围培养基略显粉色，其他菌不生长。 1106 ：控制菌检查法 铜绿假单胞菌 ③染色镜检：镜检为阴性杆菌者进一步实验 ④氧化酶实验：菌落+1%二甲基对本二胺试液，观察培养物颜色，阳性为粉红色或紫红色 ⑤绿脓菌素试验：菌落接种至绿脓菌素培养基上，36±1℃培养 18- 24小时，加氯仿，待氯仿层为蓝色时，将氯仿吸入小试管，加1mol/L盐酸1ml振摇,观察分层后上层盐酸层的颜色，阳性为粉红色或紫红色 1106 ：控制菌检查法 铜绿假单胞菌 ⑥ 硝酸盐还原产气实验：菌落接种入硝酸盐胨水培养基（加小导管）， 36±1℃培养 24小时，小导管有气为阳性。 ⑦明胶液化实验：挑菌落穿刺接种明胶培养基内，36±1℃培养 24±2小时，取出放冰箱30分钟，观察表面培养基溶解情况，溶解为阳性。 ⑧42 ℃生长实验：菌落接种普通营养琼脂斜面培养基， 42±1℃培养 24- 48小时，有生长为阳性 1106 ：控制菌检查法 铜绿假单胞菌 ⑨结果报告： 革兰氏阴性杆菌、氧化酶实验阳性及绿脓菌素试验阳性即可报告检出。 如绿脓菌素试验阴性而明胶液化实验、硝酸盐还原产气实验、42 ℃生长实验均为阳性，仍可报告检出 1106 ：控制菌检查法 铜绿假单胞菌反应原理： ①氧化酶实验:氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有红色的醌类化合物。主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。 ②绿脓菌素实验:能代谢产生一种水溶性色素，使培养基变成绿色。为蓝绿色的吩嗪类化合物，无荧光性。另一种为荧光素，呈绿色。绿脓素只有绿脓杆菌产生，故有鉴别意义。 1106 ：控制菌检查法 1106 ：控制菌检查法 铜绿假单胞菌检查注意事项： ①增菌培养可适当延长时间 ②有疑似菌时，可与阳性对照菌一起进行确证实验 ③不同类型的样品有时会影响增菌液色素 ④1%二甲基对本二胺试液不稳定，以新鲜配制使用 菌进一步实验，避免漏检。 1106 ：控制菌检查法 铜绿假单胞菌检查注意事项 ⑤十六烷基三甲基溴化铵琼脂培养基开启后注意防潮，分离时宜加阳性菌控制培养基的适用性，避免假阴性 ⑥对十六烷基三甲基溴化铵琼脂培养基上可多挑几个菌进一步实验，避免漏检。 1106 ：控制菌检查法 金黄色葡萄球菌 1106 ：控制菌检查法 金黄色葡萄球菌 ①增菌培养 取相当于 1g 或 1mL 供试品的供试 液，接种胰酪大豆胨液体培养基中培养 18-24 小时。 ②选择和分离培养 取上述预培养物划线接种于甘露醇氯化