十六章-抗生素药物的精选.ppt

四环素有关物质TLC图 I. 供试液( 5 mg/ml) ETC ( 0.2 mg/ml) ATC ( 0.025 mg/ml) IV. EATC ( 0.025 mg/ml) CTC ( 0.1 mg/ml) VI. 混合液 4％ 0.5％ 0.5％ 2％ 吸收度 （二） nm max 355 268 l 、 盐酸四环素 杂质吸收度 取供试品配成每10mg/ml的溶液至4cm的吸收池中，在530nm处测定，其吸收度不得超过0.12。 应严格控制温度和时间 四、 含量测定 HPLC法 盐酸四环素的测定 系统适用性试验：盐酸四环素、有关 物质及ATC峰间的 分离度均应符合要 求。 定量方法：外标法以峰面积计。 第五节 抗生素类药物中高分子 杂质的检查 1.高分子杂质 分子量大于药物本身的杂质总称。 蛋白、多肽、多糖或抗生素与蛋白、多肽、多糖的结合物。主要来自于发酵工艺，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。 药物的自身聚合物，来自于生产、贮存过程。可引发过敏。 外源性杂质 内源性杂质 2、基本特点－对青霉素而言 青霉噻唑多肽－外源性的（2400～3500） 青霉素聚合物－内源性的（聚合度） 母核参与的聚合反应－N型聚合反应 侧链参与的聚合反应－L型聚合反应 分类 （1）生产过程中的任何蛋白或碎片都可带入产品中，易与药物形成多肽类杂质 （2）形成的聚合物也可发生不同程度的降解 （3）异构体之间可以相互聚合－L-L、D-D、L-D （4）高分子杂质与生产工艺密切相关 特点 高分子杂质的控制方法 （1）高效液相色谱法 （2）凝胶色谱－自身对照外标法 Sephadex G-10 （3）离子交换色谱 凝胶色谱法：利用凝胶的分子筛作用，让药物分子自由的进入到凝胶颗粒内部，而高分子杂质被排阻的原理进行的。故此大分子则先流出色谱柱，小分子后出峰而得以分离。 高分子杂质的分析方法 （1）蓝色葡聚糖在高分子分离中的 N＞2500/m，拖尾因子0.75～1.5 （2）峰面积的RSD＜5％ 色谱适用性条件 HPLC系统 简单测定系统 分析方法 异羟肟酸：R-(C=O)-N-OH羟肟酸:R-C=N-OH * 坂口反应 N-甲基葡萄 糖胺反应 麦芽酚反应 二、 鉴别 茚三酮反应 （一） △ 羟基胺类和α-氨基酸性质 + △ 蓝紫色 （二）Molisch试验 具有五碳糖或六碳糖结构 H+ 糠 醛 羟甲基糠醛 α-萘酚 红紫色 蒽酮 蓝紫色 红紫色 羟甲基糠醛 糠醛与蒽酮的呈色原理 羟甲基糠醛 蓝紫色 （三） N-甲基葡萄糖胺反应 乙酰丙酮 OH- 吡咯衍生物（I） 对二甲氨基苯甲醛 H+ 樱桃红色（II) （Elson-Morgan反应） 新霉素 巴龙霉素 (缩合) 樱桃红色 对二甲氨基苯甲醛 H+ （4）麦芽酚反应－链霉素的特征反应 H+ 分子重排 麦芽酚 链霉素特有反应 （或α-萘酚） 8-羟基喹啉 （五）坂口反应 α-萘酚 ＋ 8－羟基喹啉 链霉胍 （六）硫酸盐反应 H+ 盐酸or硝酸 不溶 （七）色谱法： 1.TLC 多以硅胶为薄层板，三氯甲烷-甲醇-浓氨水为展开剂，茚三酮或碘蒸汽为显色剂。 2.HPLC 供试品溶液和对照品溶液的色谱图进行鉴别 （八） UV法 链霉素在230nm处有紫外吸收。 庆大霉素、奈替米星等无紫外吸收。 （九） IR法 特殊杂质的检查及组分分析 （一）链霉素中链霉素B 1.来源——发酵过程中产生的甘露糖链霉素 2.活性——链霉素的20%-25% 3.检查方法——TLC/水解，甘露糖为对照 3.色谱条件——薄层板：硅胶G 显色剂：1,3萘二酚-硫酸 + + 4 10 . pH 吲哚衍生物 巯基醋酸 邻苯二醛 氨基 λmax = 330nm 衍生化原理 1. (二）庆大霉素中组分C的检查－衍生化后HPLC色谱柱、流动相、检测波长、衍生化条件的摸索。 组分C的毒副作用和耐药性与庆大霉素有差异，导致产品的效价和临床疗效 1-烷基硫代-2-烷基 异吲哚衍生物 RP－HPLC 方法 2. 规定 C1 25~50% C1a 15~40% C2a +C2 20~50% 计算 3. 峰面积归一化法 四、