真核生物基因组DNA的提取-电泳.pptVIP

* * * * * * * 置50°C水浴50分钟讲解： 能溶解入10％一l5％的水分，因溶解的水分而损失部分DNA (酚不能抑制RNAase的活性, 溶解掉部分ploy(A)RNA) * * * * 分子生物学实验 1、 欢迎大家参加分生实验的学习！ 2、 分生实验的重要性； 3、 每组2人，做一份实验； 4、 守纪律，听老师安排，穿白衣； 5、 同学们在听课时要作好记录; 6、 上课时间、课间休息。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 考试形式 实验成绩考核占总成绩40%，满分为40分。缺实验课成绩者，本课程不予通过。 随堂考试（10分）(主要考察理论课与实验课结合内容 ) 闭卷考试（15分)(实验方法及原理、实验结果及注意事项、仪器设备操作及注意事项和对失败结果的原因的分析 ) 实验设计（15分）(实验名称、实验目的、方法和步骤预期实验结果、关键问题讨论及参考文献) Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 实验课安排 实验一 基因组DNA的提取 实验二 PCR及琼脂糖凝胶电泳检测 实验三 PCR产物的限制性酶切片段分析 实验四 总RNA的提取及逆转录 实验五 PCR产物的TA连接 实验六 转化 实验七 质粒的提取、酶切鉴定 实验八 讨论及实验课考试 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 实验课安排 1. 提取基因组DNA 重组质粒 6.连接产物转化 无质粒的E.Coli 死亡 有质粒的E.Coli 存活 2. PCR获取目的基因 7. 重组质粒提取及酶切鉴定 质粒 5. TA 连接 4. RNA提取与逆转录 T载体 平板筛选 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. ?一、加样器的使用及注意事项 1、 用途 2、 使用 2.1 根据取样量，选择合适的加样器。 5ul、50ul、500ul，应选择哪个加样器? 顶部标有加样器的最大量程， 分别为： 20ul: 0.5 ~ 20 ?l 100/200ul: 20 ~ 100/200 ?l 1000ul: 200ul ~ 1000 ?l 实验仪器的使用及注意事项 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 练习：加样器读数为 100，实际体积各为多少? 2.2 如何调节？ (1)首先观察目前读数,假设为050: 1000 ?l: 500 ?l 100 ?l: 50 ?l 20 ?l： 5 ?l (2)顺时针调节--- 读数变小 逆时针调节--- 读数变大 (3)注意：调节前加样器读数正处于最大量程或最小量程时，如果向错误方向调节，马上会超出量程，将会损害加样器的精度。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 2.3 加样器使用步骤(示教及学生练习)： 6）(吸头内有液体时，不能将加样器倒置或平放，以防液体倒流损坏加样器！) 贴容器内壁，将液体匀速打出，加样器推到第二挡。观察吸头内液体是否完全打出并立即弃于废物盒内. 5）抬起加样器,估计体积是否正确,将外壁液体用容器口引流回去 4）缓慢松开拇指,吸取液体。松开过快，液体上冲会腐蚀加样器;完全放开拇指后，停留约半秒钟, 急于离开液面，容易吸入空气。 3）