DNA损伤、修复与重组.ppt

DNA损伤 、修复与重组 诱 变 突变 指DNA碱基序列发生的永久的可遗传的改变。 如果发生在DNA的非编码区、非调节区或密码子的第3个碱基，它不会影响渗入蛋白质中的氨基酸——沉默突变（silent mutation）； 如果发生氨基酸的改变——错义突变（missense mutation）。 形成新的终止密码的突变——无义突变（nonsense mutation），产生截短的蛋白质产物。 移码突变（frame shift mutation）：基因中增加或减少碱基（改变的碱基数不是3的倍数），该位点后面的序列发生移码。 复制忠实性 复制的精确性有3种机制： 1、互补碱基配对原则（模板链和进入核苷酸在DNA聚合酶的作用位点正确配对）； 3、逃脱校对的错误可被错配修复机制所纠正。 诱变剂 常见的物理诱变剂为紫外线，它引起相邻嘧啶核苷酸产生嘧啶二聚体。 化学诱变剂种类很多，碱基类似物可改变 碱基配对特性，诱发直接突变（如5—溴尿嘧啶是胸腺嘧啶的类似物）。 烷化剂能在DNA不同位置加上烷基，造成碱基脱落，经修复才能防止DNA损伤，细胞对损伤的处理有可能会由于间接诱变而导致突变。 直接诱变和间接诱变 DNA中存在稳定的、配对特性发生改变的碱基而导致的突变为直接诱变。 在有些情况下，一些损伤DNA聚合酶（临时装置）为了保证染色体的完整性，进行转移损伤DNA合成，即在损伤对应的位点上插入错误的碱基，导致间接诱变；此时损伤被容忍。 突变发生在损伤的位点上为定点突变，发生在其它位点为非定点突变。 原核生物中转移损伤DNA合成属于对DNA损伤的SOS反应中的一部分，有时也叫“易错修复”。 SOS修复是指DNA受到严重损伤、细胞处于危急状态时所诱导的一种DNA修复方式，修复结果只是能维持基因组的完整性，提高细胞的生成率，但留下的错误较多，故又称为错误倾向修复(errorprone repair)，使细胞有较高的突变率。 SOS反应的起始是通过损伤的处理，RecA的活化而引起。我们现在尚不知道损伤与RecA活性改变之间的关系。一般都关心RecA是怎样被激活的。这也是和其它修复途径的不同之处。其它修复途径的酶是已存在于细胞中的，而SOS修复的酶系统是经损伤诱导才产生的。 诱导的信号可能由DNA释放出的小分子组成的，或者是DNA本身某些结构变化。在体外RecA的激活需要单链DNA和ATP的存在。这样激活信号可能存在于损伤位点的单链区。无论信号是怎样产生的，它和RecA的相互作用是很快的，SOS反应在产生损伤的几分钟内就发生了。 RreA的激活导致LexA的基因产物的剪切。LexA是一种小分子蛋白（22KDa），在被处理的细胞中是相对稳定的，它的功能是很多操纵子的阻遏物。 此剪切反应是很特殊的；LexA有一种潜在的蛋白酶活性，它可被RecA激活，当RecA被激活后又可导致LexA自我催化它本身的裂解，这样LexA的阻遏功能失去了活性，并且同时诱导了它所结合的操纵子。 RecA和LexA在SOS调节循环中互为靶位点和靶蛋白。RecA触发LexA的剪切，LexA又是RecA的阻遏物。 大肠杆菌SOS反应中的非定点突变的发生与dinB基因有关。 DinB蛋白的Pol活性(Pol Ⅳ)，无3’→5’校读功能。高表达时，可导致非定点突变的明显升高达上千倍。于无损伤模板掺入错误率达10-3～10-4。 大肠杆菌的转移损伤DNA合成依赖于UmuD2C复合体，其中介的途径通常是易误性的，它的突变引起诱发突变频率的抑制。 UmuD’2C复合体也具有Pol活性(称为Pol V)。它在损伤或未损伤DNA模板皆表现为高度易误性，能有效地跨越DNA上的无碱基部位(abasic site)并优先插入一个腺嘌呤。 酿酒酵母细胞复制后修复途径有三个独立旁路(一个易误，两个无误)。 基因REV1、REV3和REV7与易误性旁路有关。其中Rev3和Rev7蛋白构成Polζ；Rev1蛋白为一具有DNA模板指导的dCMP转移酶活性，因此也是一种Pol。 在芽生酵母中的两条无误复制后修复途径依赖RAD5和RAD30基因。RAD30基因与大肠杆菌的DinB和UmuC和酿酒酵母中的Rev1基因同源。它可在DNA合成时在嘧啶二聚体的对面正确掺入两个腺嘌呤。它是一个保真度很低的Pol，其掺入差错率高达10-2到10-3。 这些与突变形成密切相关的Pol在人细胞中都找到了相应的同源基因，与酵母中的REV3同源的hREV3编码的Polζ以及与Rev1同源的基因；与大肠杆菌中的DinB和酵母RAD30同源的hDinB基因编码Polθ；与大肠杆菌UmuC和酵母RAD30同源的hRAD30基因编码Polη、另一与酵母RAD30同源的hRAD30B编码的Polι。 已