细胞信号转导讲解.pptx

MED12 Controls the Response to Multiple Cancer Drugs through Regulation of TGF-β Receptor Signaling 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）约占80%。2007年Soda等在NSCLC患者肿瘤标本中首次发现由2号染色体短臂内转位inv（2）（p21p23）形成的棘皮动物微管相关类蛋白4（echinoderm microtubule-associated proteinlike4, EML4）与间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase, ALK）的融合基因。已有研究表明EML4-ALK可诱导肿瘤生成，给予ALK抑制剂后肿瘤可迅速消退。在目前已报道的研究中EML4-ALK融合基因在NSCLC中的阳性率约为5%，EML4-ALK融合基因已成为肺癌临床治疗新靶点。 通过构建RNAi表达载体制备shRNA(发卡结构小干扰RNA)，已成为进行RNA干扰实验的常用手段之一。 而目前为了感染原代细胞和难感染的细胞系或者在动物水平进行RNAi，研究科学家更多的选择了慢病毒载体。在RNAi的研究中，为了感染原代细胞和难感染的细胞系，科学家开始借助于病毒载体实现RNAi；由于慢病毒可以同时感染分裂和非分裂细胞、整合性以及免疫原性低等优点，目前在RNAi的研究中，基于慢病毒构建的shRNA被最广泛的使用。而在RNAi研究需要长期观察或者需要进行动物实验时，基于慢病毒构建的shRNA的优势更为明显。 large-scale RNAi screen BRAF是一种癌基因，它编码一种丝/苏氨酸特异性激酶，是RAS/RAF/MEK/ERK/MAPK通路重要的转导因子，参与调控细胞内多种生物学事件，如细胞生长、分化和凋亡等。研究表明，在多种人类恶性肿瘤中，如恶性黑色素瘤、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、肝癌及胰腺癌等均存在不同比例的BRAF基因突变，约66%恶性黑色素瘤和15％的结肠癌中BRAF基因存在体细胞错义突变。大约80-90%的BRAF基因突变发生在exon15的1799核苷酸上，T突变为A，导致其编码的谷氨酸由缬氨酸取代(V600E)。目前认为，V600E突变可模拟T599和S602两个位点的磷酸化过程，从而使BRAF蛋白异常激活. MEK（MAPK/ERK激酶）?MEK分为分子量44kD和45kD的MEK1和MEK2两种。Raf被激活后，它的C端催化区能与MEK结合，并使其催化区第Ⅷ亚区中两个Ser磷酸化，从而使MEK激活。MEK属于少有的双重特异性激酶，使Tyr和Thr两个调节位点磷酸化而激活ERK。但MEK如何兼具Tyr和Thr双特异性磷酸化活性目前尚不清楚，不过MEK对ERK的Tyr/Thr双特异性磷酸化具有重要的生理意义，因为ERK信号通路在细胞信号转导网络中处于枢纽地位，任何错误的活化都会对细胞生命活动产生深远的影响，而这种双特异性的识别和激活机制，大大提高了信号转导的准确性，防止了ERK的错误激活。 EMT 上皮细胞在某些因素的作用下，细胞极性、细胞间密连接和黏附连接逐渐消失，而获得了游走和侵袭性的迁移能力，并产生了大量的细胞外基质成分，抑制了细胞凋亡，变成了具有间质细胞形态和特性的细胞，此改变称为EMT。上皮细胞具有非常典型的游离-基底面极性，而且细胞间紧密连接与黏附连接也限制了其任意迁移的能力。在EMT过程中，细胞功能发生了一些变化，与相邻的细胞分离开，迁移到邻近组织，其主要分子特征如角蛋白、E-钙黏素等上皮标记物表达了下调，和波形蛋白、N-钙黏素等间质标记物表达了上调。此外，如果肿瘤细胞发生了转移，在微环境等某些因素的刺激下，转化的上皮细胞又可再分化为上皮细胞，即可以再次发生间质-上皮转化，又获得了上皮细胞的特性，即E-钙黏素表达的上调。EMT不仅存在于胚胎发育的过程中，同时还和多种慢性病，如肾纤维化的发生与肿瘤侵袭及转移有着密切的联系。在EMT过程中有时发生功能的改变，有时只以上皮表型为主，但是同时都会存在间质表型。 CONTENTS ABSTRATE INTRODUCTION RESULTS SUMMERY DISCUSSION ABSTRATE 在包含EML4-ALK易位或激活EGFR突变体的肺癌中，ALK和EGF受体酪氨酸激酶的抑制子刺激产生强烈而短暂的反应。我们利用大范围的RNAi筛选方法鉴定到MED12，它是癌症中被突变的转录调节复合物，可以作为ALK和EGFR抑制子应答的一个决定性因子。MED12部分存在于细胞质中，在这里它可以通过生理相互作用负调控TGF-βR2。MED12被抑制时，TGF-βR信号通路被激活，