农杆菌介导法转Bt毒蛋白樱桃分析报告.docxVIP

基因工程课题设计课题名称：农杆菌介导法转BT毒蛋白樱桃的初步研究班级：生物科学2013姓名：陈文宇学号：201346602015课 题 基 本 信 息研究课题摘要研究目标、内容、方法及意义Bt毒蛋白基因是目前世界上应用最为广泛的抗虫基因,已经被转入多种作物中。其中,棉花、玉米、马铃薯等转Bt毒蛋白基因抗虫作物已经商品化生产,创造了可观的经济效益。结合转Bt毒蛋白基因技术的成熟以及转Bt毒蛋白基因抗虫作物的培育现状,以及樱桃易受虫害危害的事实，主要研究运用农杆菌介导法将Bt毒蛋白基因转入樱桃中，以获得转Bt毒蛋白的抗虫樱桃。以此提高樱桃的产量及减少农药对人体的危害。同时降低樱桃昂贵的价格，使樱桃成为广大消费者食用的佳品。课题研究目的和意义虫害是制约农作物高产的重要因素，世界每年因虫害造成的损失约占农作物总产量的15%以上。化学农药的施用在减少虫害的同时引起一系列副作用，如提高成本、污染环境、诱导害虫产生抗药性、引起次要害虫的大发生等。而通过基因工程手段培育抗虫新品种可从根本上解决问题，对哺乳动物和一些有益昆虫不产生毒害作用，且不造成环境污染。人们已从细菌中、植物本身以及昆虫体内发现并分离到许多抗虫基因，其中棉花、玉米、马铃薯等转Bt毒蛋白基因抗虫作物已经商品化生产,创造了可观的经济效益。樱桃属于蔷薇科落叶乔木果树，我国华东和河北、山西、河南、湖北、四川等地均有栽培，夏初果实成熟时采收，洗净鲜用。樱桃医疗保健价值颇高。樱桃味甘微酸，入脾、肝经。补中益气，祛风胜湿，主水谷痢，止泄精。主治病后体虚气弱，气短心悸，倦怠食少，咽干口渴，及风湿腰腿疼痛，四肢不仁，关节屈伸不利，冻疮等病症。常食樱桃可补充体内对铁元素量的需求，促进血红蛋白再生，既可防治缺铁性贫血，又可增强体质，健脑益智。给小儿饮用樱桃汁能够预防感染麻疹。樱桃核则具有发汗透疹解毒的作用。樱桃可祛风胜湿、杀虫樱桃性温热，兼具补中益气之功，能祛风除湿，对风湿腰腿疼痛有良效。樱桃树根还具有很强的驱虫、杀虫作用，可驱杀蛔虫、蛲虫、绦虫等。樱桃可以治疗烧烫伤，起到收敛止痛，防止伤处起泡化脓的作用。同时樱桃还能治疗轻、重度冻伤。樱桃所含蛋白质、糖、磷、胡萝卜素、维生素C等均比苹果、梨高，尤其含铁量高，常用樱桃汁涂擦面部及皱纹处，能使面部皮肤红润嫩白，去皱消斑。在水果家族中，一般铁的含量较低，樱桃却卓然不群，一枝独秀：每百克樱桃中含铁量多达59毫克，居于水果首位；维生素A含量比葡萄、苹果、橘子多4～5倍。2.含糖、枸椽酸、酒石酸、胡萝卜素、维生素C、铁、钙、磷等成分。樱桃的栽培过程中，喷洒了大量的农药和其他化学物质，其残留的农药和化学物质在人食用之后会对人体造成巨大的危害。樱桃的栽培过程中主要害虫有介壳虫、卷叶蛾、绿盲蝽、梨小食心虫、金龟子、梨花网蝽（梨军配虫）、象甲、叶螨（山楂叶螨、二斑叶螨等）、叶蝉等。而且对樱桃树的用药也分为地面处理用药和树上用药，不仅造成农药残留，还会造成土壤和水源的污染和环境的破坏。随着现代分子生物技术的发展，我们拥有了将樱桃树转基因的条件。拥有了新的方法来减少樱桃所遭受的虫害，即转Bt基因樱桃。转Bt基因樱桃是将人工分离和修饰过的Bt毒蛋白基因导入到樱桃树基因组中。我们主要是将苏云金芽孢杆菌中可以产生杀虫晶体蛋白的基因片段导入樱桃树生殖细胞，并将其培育成成熟植株。，使这些樱桃树具有杀虫能力。苏云金芽孢杆菌是一种分布广泛的革兰氏阳性土壤细菌，在形成芽孢的同时会在菌体的一端或两端形成伴孢晶体，即杀虫晶体蛋白。伴孢晶体被敏感昆虫幼虫吞食后，在肠道碱性环境和蛋白酶作用下释放出的毒性肽与昆虫中肠上皮细胞的特异受体结合形成离子通道，破坏细胞渗透平衡，使细胞肿胀破裂，最终导致昆虫死亡。其对鳞翅目、鞘翅目、双翅目和膜翅目等多种重要的农林业害虫都具毒杀作用。国内外同类研究现状、水平及发展趋势泰国农业大学的Anon Thammasittirong和Tipvadee Attathom通过PCR技术，检测了泰国当地的苏云金芽孢杆菌中杀虫晶体蛋白基因。这篇文献中，两位科学家运用PCR技术对泰国不同地区，不同生态环境的134种苏云金芽孢杆菌菌群进行了杀虫晶体蛋白基因序列的检测。并将得到的结果与前人所做的进行了对比。两位科学家先将菌株在37摄氏度条件下，在天然培养基琼脂平板上培养16小时。然后将一环菌体转移到3ml的LB培养基中，震荡培养一夜。之后将其两次离心，上清液加入到苯酚中再进行离心。再经过氯仿、乙醇、TE缓冲液等的处理，最后得到进行PCR测定需要的DNA。由前人研究已知基因Cry1,Cry2和Cry9对产生特异性杀死鳞翅目昆虫的晶体蛋白是必须的。通过PCR检测，分析得到的三种基因的分布频率与其他的研究相比较多。两位科学家分析认为这是由于他们使用的探针不同所致。研究结果还得到了基