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选修3易考知识点背诵
专题1 ? 基因工程
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术。
(一)基因工程的基本工具
1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)
(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。
(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。
(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。
2.“分子缝合针”——DNA连接酶
(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较:
①相同点:都缝合磷酸二酯键。
②区别:E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。
(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。
DNA连接酶DNA聚合酶DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成磷酸二酯键 化学本质 蛋白质 3.“分子运输车”——载体
(1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。
③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。
(2)最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
(3)其它载体: 入噬菌体的衍生物、动植物病毒
(二)基因工程的基本操作程序
第一步:目的基因的获取
目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因 。
目的基因获取方法:从基因文库中获取; PCR技术扩增目的基因;人工化学直接合成
2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。
3.PCR技术扩增目的基因
(1)原理:DNA双链复制
(2)过程:第一步:(变性)加热至90~95℃DNA解链;第二步:(复性)冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;第三步:(延伸)加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步:基因表达载体的构建(核心)农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。
其次还有 基因枪法是单子叶植物中常用的一种基因转化方法,但是成本较高
花粉管通道法这是我国科学家独创的一种方法,是一种十分简便经济的方法。(我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的)
将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是 显微注射技术。方法的受体细胞多是 受精卵。
操作程序:目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵) →显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到雌性动物的输卵管或子宫内发育→新性状动物。
将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ,最常用的原核细胞是 大肠杆菌 ,其转化方法是:先用 Ca2+ 处理细胞,使其成为 感受态细胞 ,再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程,定向改造天然蛋白质,甚至创造自然界不存在的 愈伤组织幼根和芽或胚状体 完整植株。
(2)用途:
微型繁殖:
(1)概念:植物的快速繁殖技术就是利用组织培养的方法将植物体某一部分的组织小块进行培养并诱导分化成大量的小植株,从而达到快速无性繁殖的目的,也称快速繁殖技术。
(2)微型繁殖技术:快速繁殖优良品种的植物组织培养技术。
(3)特点:①保持优良品种的遗传特性。②高效快速地实现种苗大量繁殖。
作物脱毒:(1)材料:无病毒的植物分生组织(茎尖)。
(2)脱毒苗:切取一定大小的茎尖进行组织培养获得的。
制造人工种子:
(1)特点:①后代不会发生性状分离。②不受季节、气候和地域限制。
(2)结构:人工薄膜和或胚状体或不定芽或顶芽或腋芽。
(3)人工种子的制备,如图人工种子主要由三部分组成,一是胚状体
(分生组织),它相当于天然种子的胚,是有生命的物质结构;二是供胚状体维持生命力和保证其在适宜的环境条件下生长发育的人工胚乳;三是具有保护作用的“人工种皮”。
(4)人工种子的优越性
①可以保持杂种优势。
②快捷高效
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