【优化方案】中生物 第四章第3节聚合酶链式反应技术课件 北师大版选修1.pptVIP

【答案】　C 【名师点睛】　细胞内DNA复制与PCR技术的原理和过程容易发生混淆，特别应注意区分PCR反应需要可变的温度，而体内DNA复制需要稳定的温度。 符合PCR技术反应条件的一项是(　　) ①稳定的缓冲溶液环境　②DNA模板　③合成引物 ④四种脱氧核糖核苷酸　⑤DNA聚合酶　⑥解旋酶 ⑦温控设备 变式训练 A．①②③④⑤⑥ B．①②③④⑤⑥⑦ C．②③④⑤⑥⑦ D．①②③④⑤⑦ 解析：选D。在PCR反应中，解旋是通过热变性实现的，用不到DNA解旋酶，其他各项都是反应必需的。 对PCR技术中DNA 片断的扩增方法和有关计算混淆不清 在遗传病及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片 段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷 贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。据图回答相关问题： 易错警示 例 (1)在相应的横线上写出引物Ⅱ，并在复性这一步骤中将引物Ⅱ置于合适的位置。 (2)在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子。 (3)若将作为原料的四种三磷酸脱氧核苷酸用32P标记，请分析循环一次后生成的DNA分子的特点是__________；循环n次后生成的DNA分子中不含放射性的单链占总单链的比例为________________。 【解析】　(1)DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链，引物就提供了3′端。子链延伸方向为5′→3′，引物Ⅰ与b链部分碱基互补，引物Ⅱ则与a链部分碱基互补，且连接到a链的3′端，故引物Ⅱ的结构为5′－G－A－OH，复性结果为： 　 　　HO－A－G－5′ 5′－G－G……T－C－3′。 (2)经过一次循环后，产生的两个DNA分子分别含有引物Ⅰ和引物Ⅱ。(3)由于作为原料的四种三磷酸脱氧核糖核苷酸被32P标记，所以新合成的子链均含有放射性，一次循环后的两个DNA各有一条链含32P，若复制n次，产生子链共2n×2，其中只有亲本的两条母链不含32P，则其所占比例为2/(2n×2)＝1/2n。 【答案】　(1)5′－G－A－OH a链 5′－G－G……T－C－3′ 　　　 HO－A－G－5′ (2)5′－G－G……T－C－3′　3′－C－C……A－G－5′ 　 3′－C－C……A－G－5′　5′－G－G……T－C－3′ (3)每个DNA分子各有一条链含32P标记　1/2n 【纠错总结】　(1)DNA母链的3′端对应着子链的5′端，即DNA的两条链是反向平行的。 (2)DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的单链片段的3′端上，需要模板，而DNA连接酶连接的是两条DNA片段的缺口，不需要模板。 (3)理论上DNA扩增的计算：DNA扩增与DNA复制类似，呈指数扩增。若只有一条DNA模 板，则复制n次后有2n条DNA；若一开始有a条模板，则复制n次后有a×2n条DNA。实际操作过程中由于无关变量的影响，一般来说实验值要略小于理论值，若扩增效率为x，y代表DNA片段总数，n代表循环次数，那么y＝(1＋x)n。 栏目导引 新知初探 思维启动 要点突破 讲练互动 知能演练 轻巧夺冠 第四章 现代生物技术 第3节　聚合酶链式反应技术 学习导航 1.尝试DNA片段的扩增和琼脂糖凝胶电泳检测技术。 2．说出PCR体外基因扩增的基本原理。 新知初探?思维启动 一、DNA片段的扩增和琼脂糖凝胶电泳检测 1．实验原理 (1)变性：温度上升到94～98 ℃，双链DNA解旋为单链 ?↓ (2)复性：温度下降到40～60 ℃，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 ↓ (3)延伸：温度上升到72 ℃时，在 ________________酶作用下，四种脱氧核苷酸通过碱基互补配对合成新DNA链 2．方法步骤 (1)DNA片段的PCR扩增 ①把混合PCR反应体系的各种药品加入到冰 浴的_______中，混合均匀后____________。每管加入30 μL无菌石蜡油。 Taq DNA聚合 EP管 低速离心 ②将EP管放入_______________中，输入并运行反应程序。 (2)DNA扩增产物的检测 ①制作电泳胶板：配制质量分数为1%的琼脂糖凝胶，制作电泳胶板 ↓ ②加样：在扩增的_________中加入_______体积的_______________，混匀后，取20 μL加入样品孔内 PCR热循环仪 DNA样品 0.2倍 载样缓冲液 ↓ ③电泳：80 V稳压电泳20～40 min ?↓ ④观察：当溴酚蓝指示剂电泳到____________ 时切断电源，戴好塑料手套，将胶板浸入 ___________溶液中染色5～10 min，在紫外透射仪上观察电泳条带 凝胶底部 溴化乙锭 (1)PCR技术是体外酶促合成特定DNA片段的一种方法