【全程复习方】版高中生物 1.1、2工具酶的发现和基因工程的诞生 基因工程的原理和技术配套课件 浙科版选修3.pptVIP

* 第一、二节 工具酶的发现和基因工程的诞生·基因工程的原理和技术 一、基因工程的工具 1.限制性核酸内切酶 (1)来源：主要从________中分离纯化出来。 (2)作用： ①特异性识别双链DNA分子的某种______________。 ②切割两个核苷酸之间的化学键。 (3)结果：产生________。 原核生物 特定核苷酸序列 粘性末端 2.DNA连接酶 作用：将具有相同_________的两个DNA片段连接在一起。 3.质粒 (1)从存在位置看，独立于______之外。 (2)从化学成分上看，为________________。 (3)从功能上看，能________。 (4)从结构上看，常含有________________。 粘性末端 染色体 双链环状DNA分子 自主复制 抗生素抗性基因 【点拨】不同DNA分子用同一种限制性核酸内切酶切割产生的粘性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制性核酸内切酶切割，产生的粘性末端一般不相同。 二、基因工程的基本操作步骤 1.获得目的基因 　已知序列：________合成或者用_____扩增 　未知序列：从________中获取 获取 方法 化学方法 PCR 基因文库 2.形成重组DNA分子 (1)用相同的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA， 以产生相同的_________。 (2)用__________连接两个切口(即相同的粘性末端)，形成 ________分子。 3.将重组DNA分子导入受体细胞 (1)常用的受体细胞：________、枯草杆菌、______和动植物细 胞等。 (2)导入方法：用________处理大肠杆菌，可以增加大肠杆菌 ________的通透性，使重组质粒容易进入。 粘性末端 DNA连接酶 重组DNA 大肠杆菌 酵母菌 氯化钙 细胞壁 4.筛选含有目的基因的受体细胞和目的基因的表达 (1)筛选：用含_______的培养基培养受体细胞，选择含________ 的受体细胞。 (2)表达：目的基因在________内产生人们需要的功能物质。 抗生素 重组质粒 宿主细胞 【点拨】在基因工程的操作中，只有目的基因导入受体细胞和筛选步骤不出现碱基互补配对现象，其余都涉及碱基互补配对。 　　　　　　　基因工程的工具 1.与DNA有关的几种酶的比较 项目 种类 限制性核酸 内切酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 作用底物 作用部位 作用结果 DNA分子 形成粘性末端 两个相邻脱氧核苷酸之间 DNA分子片段 形成重组DNA分子 两个相邻脱氧核苷酸之间 脱氧核苷酸 形成新的DNA分子 两个相邻脱氧核苷酸之间 项目 种类 DNA(水解)酶 DNA解旋酶 作用底物 作用部位 作用结果 两个相邻脱氧核苷酸之间 DNA分子 DNA分子 形成脱氧核苷酸 形成单链DNA分子 碱基对间的氢键 2.作为载体的条件 (1)能在宿主细胞中稳定保存并大量复制。 (2)有一个至多个限制性核酸内切酶切割点，以便与外源基因连接。 (3)具有特殊的标记基因，便于筛选。 【高考警示钟】 1.限制性核酸内切酶切割的化学键为两个相邻脱氧核苷酸之间的化学键而不是氢键。 2.在切割目的基因和载体时要求用同一种限制性核酸内切酶,目的是产生相同的粘性末端。 3.限制性核酸内切酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便进行检测。 【典例训练1】(2011·浙江高考)将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是( ) A.每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C.每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D.每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 【解题指南】 1.知识储备： (1)重组质粒必须具备的条件。 (2)目的基因导入成功的标志。 2.解题关键： (1)明确每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点。 (2)由题干信息“成功表达腺苷酸脱氨酶”推出目的基因导入成功，并能表达腺苷酸脱氨酶分子。 【解析】选C。ada为目的基因，大肠杆菌为受体细胞，将目的基因导入大肠杆菌时如果能成功表达说明每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒；要让目的基因与质粒形成重组质粒，两者必须用同种限制性核酸内切酶切割，所以每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点；质粒作为载体的条件之一是有多种限制性核酸内切酶的识别位点，但每种限制性核酸内切酶只有一个识别位点，只能插入一个目的基因(ada)；ada导入大肠杆菌成功的标志是表达腺苷酸脱氨酶，因此每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子。 基因工程的基本操作步骤 1.获得