PGE2制备综述.pptxVIP

前列腺素E2（PGE2)的制备 胡婷、薛鹏辉、阮蓉、李国栋 目录 前列腺素简介 工艺过程 PGE2质量标准 前列腺素简介 前列腺素（prostaglandin，PG）是存在于动物和人体中的一类不饱和脂肪酸组成的、具有多种生理作用的活性物质。 最早发现它存在于人的精液中，当时以为这一物质是由前列腺释放的，因而定名为前列腺素。现已证明精液中的前列腺素主要来自精囊，全身许多组织细胞都能产生前列腺素。前列腺素（PG）在体内由花生四烯酸所合成，结构为一个五环和两条侧链构成的20碳不饱和脂肪酸。按其结构，前列腺素分为A、B、C、D、E、F、G、H、I等类型。不同类型的前列腺素具有不同的功能，如前列腺素E能舒张支气管平滑肌，降低通气阻力；而前列腺素F的作用则相反。前列腺素的半衰期极短（1～2分钟），除前列腺素I2外，其他的前列腺素经肺和肝迅速降解，故前列腺素不像典型的激素那样，通过循环影响远距离靶向组织的活动，而是在局部产生和释放，对产生前列腺素的细胞本身或对邻近细胞的生理活动发挥调节作用。前列腺素对内分泌、生殖、消化、血液呼吸、心血管、泌尿及神经系统均有作用。 前列腺素E2 PGE2为含羧基及羟基的二十碳五元环不饱和脂肪酸，分子式为C20H32O5，分子量为352，结构如图。 PGE2为白色晶体，熔点68~69℃，溶于醋酸乙酯、丙酮、乙醚、甲醇及乙醇等有机溶剂，不溶于水。在酸性及碱性条件下可分别异化为PGA2和PGB2，后二者紫外吸收最大波长分别为217nm和278nm. 前列腺素E2(PGE2)功能： 1、PGE2能诱发炎症，促进局部血管扩张，毛细血管通透性增加，引起红、肿、痛、热等症状。 2、pge2能使动脉平滑肌舒张，有降低血压的作用。 3、pge2能抑制胃酸分泌，促进胃肠平滑肌蠕动。 4、卵泡产生的pge2及pgf2a在排卵过程中起重要作用。 5、PGE2在宫颈成熟过程中发挥重要作用。 6、用于抗早孕、扩宫颈及中期引产、用于妊娠早期流产 7、PGE2还会引起不少病理反应，如风湿性关节炎，近年来有学者发现其对癌细胞的增殖有促进作用。 前列腺素E2(PGE2)主要药物： 地诺前列酮 别名：前列腺素E2，PGE2 ，普贝生，普比迪 主要适用症 收缩各期妊娠子宫 不良反应 腹泻、恶心、呕吐、发热 主要用于：引产、催产、产后出血 技术路线 羊精囊 羊精囊 [提取] 花生四烯酸 转化液 [转化] 37oC 滤液 [提取] 丙酮 过滤 浓缩液 [浓缩] 减压浓缩 [萃取、浓缩] 乙醚，氯仿 减压蒸馏 PGE粗品 [分离、浓缩] 柱层析 减压蒸馏 PGE2粗品 [纯化、浓缩] 柱层析 减压蒸馏 浓缩物 [结晶] 醋酸乙酯 过滤 结晶 [干燥] 35oC 纯品 酶的制备 酶转化 PGE粗品制备 PGE2分离 PGE2纯化 酶的制备 取-30℃冷藏的羊精囊，除去结缔组织及脂肪，每1kg加1L 0.154mol/L氯化钾溶液，在4000r/min下离心25min，取上清液，过滤，得清液。残渣加氯化钾再提取一次，离心过滤后，合并二次上清液。加2mol/L枸橼酸调pH5，在4000r/min下离心25min，弃上清液，加100 ml 0.2mol/L磷酸盐缓冲液洗下沉淀，再加100ml 6.2.5×10-5 mol/L EDTA溶液搅匀，加2mol/L氢氧化钾调pH8，得酶混悬液。取酶的混悬液，每升加氢醌40mg、加GSH 500mg，先用少量水溶解后，加入酶的混悬液中，再将1kg羊精囊加1g AA，搅拌通氧，升温至37-38℃，孵育1h，得反应液。 酶转化 绵羊精囊[pH8]→[KCl, EDTA Na2]酶混悬液[氢醌，谷胱甘肽]→[花生四烯酸，O2]反应液 PGE粗品的制备 将反应液加丙酮(第一次3倍量，第二次2倍量)提取两次，每次0.5-1h，过滤，合并两次滤液，45℃减压浓缩或薄膜浓缩，得浓缩液。加4mol/L盐酸调pH 3，加乙醚、0.2mol/L磷酸盐缓冲液、石油醚分别萃取3次，取水层，加4mol/L盐酸调pH 3，加二氯甲烷萃取3次，二氯甲烷层经水洗、无水硫酸钠脱水后，密塞置冰箱中过夜，过滤，40℃以下减压浓缩得黄色油状物，即PGS粗品。每1g PGS粗品用15g 100-160目活化硅胶，湿法装柱。将PGS粗品溶解于少量氯仿，过柱层析分离，依次以氯仿、V氯仿：V甲醇=98：2、 V氯仿：V甲醇=96：4三种溶液洗脱，收集洗脱液，硅胶柱层析鉴定，相同洗脱液合并，得PGA和PGE部分。将PGE洗脱液在35℃以下浓缩，得PGE粗品。 反应液[丙酮，乙醚，二氯甲烷]→PGS粗品[硅胶柱]→PGE粗品 PGE2分离 每1g PGE粗品用20g硅胶，取200-250目10倍PGE质量